高效液相色谱讲座(1-6)_中科院大连化物所

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1、讲座高效液相色谱讲座*第一讲高效液相色谱概貌和设备王俊德（中国科学院大连化学物理研究所）§1．液相色谱的发展简史率尚不理想。色谱是这样一个过程，即混合物中各组六十年代中后期，由于把从气相色谱得分在称之为固定相和流动相的两相之间具有到的广泛的理论和实践上的经验应用于液相不同的分配系数，因而当此混合物从固定相色谱系统的设计，以及在机械、光学和电子的一端加入并随流动相向前移动的过程中，等技术上的进步，沉睡多年的液相色谱技术各组分在固定相上有不同的保留而被分离。开始苏醒。出现了包括高效分离柱、高压输历史上第一次提出“色谱”(Chromat

2、ogra-液泵和高灵敏度检测器的近代高效液相色谱phy)这个名词，并用来描述这种实验的人是装置和仪器。在柱效、速度和灵敏度方面远俄国植物化学家茨维特（Tswett，他在1906远超过经典液相色谱。七十年代中期以后，年发表的关于色谱的论文中写到：一植物色微处理机技术用于液相色谱，进一步提高了素的石油醚溶液从一根主要装有碳酸钙吸附仪器的自动化水平和分析精度。由于高效液剂的玻璃管上端加入，沿管滤下，后用纯石油相色谱的实际分离时间可以是比较短的，但醚淋洗，结果按照不同色素的吸附顺序在管操作条件的选择和定性定量分析是件费时、内观察到它们相应

3、的色带，就象光谱一样。茨费力、麻烦的工作，因而下一个目标将是发维特把这些色带称为“色谱图”(Chromatog-展能解决这类问题的具有某些人工智能的色ram)，相应的方法叫做“色谱法”(Chroma-谱仪器。目前高效液相色谱已成为化学、化tographicmethod)。这就是最初的液相色工、生化、医学和环保等学科领域中重要的谱。后来约20年间这一技术并未得到人们的分离分析技术，是分析化学家手中用以解决重视。三十年代以后，纸色谱、离子交换色他们面临的各种实际分析课题必不可缺少的谱和薄层色谱相继出现。特别是1952年英国工具。分析仪

4、器国际市场的最近调查表明，学者马丁（Martin）和辛格（Synge）基于他们液相色谱（包括高效液相色谱，柱色谱，氨在四十年代在分配色谱方面的研究工作，提基酸分析和离子交换色谱）是分析仪器中最出了关于气－液分配色谱的比较完整的理论大的市场。预计在1984年继续以年平均增长和方法，把色谱技术向前推进了一大步。气相率20％的速度发展。其中高效液相色谱则是色谱在此后的十多年间发展十分迅速。1958增长最快的，达26。年基于Moore和Stein的工作，离子交换色2．高效液相色谱的特点与其他色谱方谱的仪器化导致了氨基酸分析仪的出现，这法的

5、比较是近代液相色谱的一个重要尝试，但分离效高效液相色谱(HighPerformance*本讲座的内容曾在1981年大连市科协和辽阳石油化纤总公司主办的两个色谱学习班上讲授过。在这两次学习班上，担任液相色谱部分讲课的有卢佩章、于衍卿、林丛敬、王俊德、张玉奎、商振华、姚荣余等。本文发表前，曾在卢佩章先生的统一指导下，由有关同志做了若干重要的修改和补充，并将陆续与读者见面。LiquidChromatography，简称HPLC）又TLC）部分地克服了TLC固有的缺点，可以称高压、高速、高分离度、近代液相或近代和高效柱液相色谱互为补充。液

6、相柱色谱，但推荐使用第一个术语，是高2）高效液相色谱与气相色谱的比较效液相色谱，尽管有人时而也称为高性能液气相色谱自五十年代出现以来，获得了相色谱。通过以下同经典液相色谱和气相色飞速发展，它的特点是高效、快速和灵敏，谱相比较，我们可以看出高效液相色谱具有其分离分析复杂混合物的能力是以前其他色分离效能高，分析速度快，检测灵敏度高和谱方法无法比拟的，应用相当广泛和普遍。应用范围广泛的特点，特别是适合于高沸点但是由于气相色谱使用气体流动相，被分析大分子，强极性和热稳定性差的化合物的分样品必须要有一定的蒸汽压，汽化后才能在离分析。柱上分析

7、，这使分离对象的范围受到一定的1）现代高效液相色谱与经典液相色限制。对于那些挥发性差的物质（高沸点化谱的比较合物），汽化温度和柱温必须很高，这不仅经典液相色谱使用的柱填料通常是给设备和仪器制造带来了不少困难，更重要＞100微米的粗粒度全孔吸附剂（硅胶或氧化的是许多高分子化合物和热不稳定的化合物铝等），固定相传质扩散缓慢，因而柱效率在汽化过程中分解，因而改变了原有的结构很低，分离能力差，只能进行简单混合物的和性质。尤其是一些生化样品等具有生物活分离；而高效液相色谱采用510微米微粒性的物质，温度过高会变性失活。这样的样填料，传质快，

8、柱效可比前者高23个数量品分析用气相色谱就难以胜任了。此外对于级，25厘米长的硅胶柱柱效可达2万理论塔一些极性化合物，如有机酸、有机碱等，气板，可以分离上百个组分，有更高的峰容量相色谱也遇到麻烦。虽然有的可通过衍生化（即一定时间内色谱图上所能容纳的