血型鉴定及血细胞标本制备与观察

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1、血型鉴定及血细胞标本制备与观察上课地点：化学楼120任课教师：陈丽杰办公地点：生化楼215电话：84706308课程要求：预习实验内容，掌握实验目的及原理、仪器和试剂、实验步骤；完成预习报告（实验名称、实验目的、实验原理、实验器材与试剂、实验方法与步骤）实验注意事项：1、实验台上物品按实验室管理老师要求摆放整齐；2、实验废物按实验室管理老师要求收集；3、实验结束后，经老师检查后方可离开。实验纪律：1、按时上课2、穿实验服（白大衣）3、不许吃东西，课堂严禁大声喧哗4、手机静音实验成绩：预习报告：2

2、0分实验操作：40分报告内容：结果和讨论40分血型鉴定及血细胞标本制备与观察（指导教师：陈丽杰）一、实验目的：掌握人体血型（ABO型）的鉴定方法和原理，观察红细胞凝集现象，同时了解自己的血型；掌握血涂片的制备方法；认识红细胞及各种白细胞的典型形态；学习巩固显微镜的使用方法。二、实验原理：红细胞膜上具有血型糖蛋白，作为抗原，也称为凝集原；ABO血型就是根据红细胞表面抗原来确定的，根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。血清中含有相应的特异性抗体称为凝

3、集素。凝集原和相应的凝集素特异性结合，使红细胞凝集成团，进而引起红细胞破裂，产生溶血。ABO血型鉴定的原理是利用红细胞凝集试验，将待测血液分别与已知含A抗体和B抗体的标准血清混合，观察是否发生凝集现象，判断待测血液红细胞上有何种抗原，由此确定待测血液的血型。三、实验器材与试剂（1）仪器与材料：普通光学显微镜，采血笔，刺血针、载玻片，盖玻片，滤纸，擦镜纸，无菌棉签，消毒牙签，培养皿等；受检者血液；生物标本永久制片。（2）试剂和药品：瑞氏-姬姆萨A液（主要成份：瑞氏染料，姬姆萨染料）；

4、瑞氏-姬姆萨B液（主要成份：磷酸盐）；抗A血型定型试剂，抗B血型定型试剂;碘伏香柏油，乙醚，乙醇四、实验步骤与操作方法（1）ABO血型鉴定①取一块清洁载玻片，用记号笔划上记号，左上角写A字，右上角写B字。②用无菌棉签蘸上碘伏，消毒无名指指端后，以消毒针刺破皮肤取血，载玻片的每侧各放入一小滴血（指端采血点勿触及载玻片！）。③用小滴管吸抗A血型定型试剂一滴加入左侧，用另一小滴管吸抗B血型定型试剂一滴加入右侧，并用牙签搅拌，使标准血清与血液混匀。（每边用一支牙签，切勿混用！）。④室温下静置10—

5、15min，观察有无凝集现象。假如只是A侧发生凝集，则血型为A型；若只是B侧发生凝集，则血型为B型；若两边均未凝集，则为O型；若两边均发生凝集，则为AB型。用碘伏消毒左手无名指指腹采血笔按住已消毒的指腹采血血滴分别滴在载玻片的两端(皮肤不可接触玻片)（2）血涂片的制作挤出第三滴血置于一干净载玻片的右侧（注意勿触及皮肤，否则血在玻片上就不能成滴）。以左手拿该片的两端，迅速用右手拿住另一干净载玻片，用其窄边接触样品（血滴），使其在两载玻片接触处展成线状。以约45°角轻推载玻片，使样品展成一薄层血

6、膜（图1）。注意推片动作要连贯，血片的厚度依血滴大小、推片速度和两片夹角而定。血滴小，速度慢，夹角小则血片薄。图1血涂片制作示意图待血片晾干后，滴加瑞氏-姬姆萨A液1滴于涂片上，并让染液覆盖整个标本涂片染色1min，再将2~3滴瑞氏-姬姆萨B液滴加于A液上面，以嘴吹出微风使液面产生涟漪，使两液充分混合，染色3~10min。水洗（冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲去，以防有沉渣沉淀在标本上），自然晾干，镜检。（3）血细胞的观察①红细胞：数量最多，体积小而圆、均匀分布，呈红色的圆盘状，边缘厚，着色

7、较深，中央薄，着色较浅，无细胞核、细胞器，胞质内充满血红蛋白；②白细胞：数量较红细胞数量少，但胞体大，细胞核明显，极易与红细胞区别开。•嗜中性粒细胞是白细胞中较多的一种，约占白细胞总数50-70%。体积比红细胞大，主要的特征是胞质中的特殊颗粒细小，分布均匀，着淡紫红色。胞核着深紫红色，一般分3—5叶，叶间以染色质丝相连。核分叶的多少与该细胞年龄有关，如核为杆状，则为嗜中性粒细胞的幼稚型。•嗜酸性粒细胞比中性粒细胞略大，数量少，约占7%以下。核常分两叶，着紫蓝色。主要特点是胞质内充满粗大、圆形的颗

8、粒，色鲜红或桔红。•嗜碱性粒细胞数量很少，约占1%以下。在一般血涂片上不易找到，体积比上述2种白细胞稍小。胞质中分散着许多大小不一的深紫蓝色颗粒。胞核形状不定,圆形或分叶，也染成紫色，但染色略浅，一般都被颗粒遮盖，形状不清。•淋巴细胞数量较多，约占20%-40%，可见中、小型，淋巴细胞。其中小淋巴细胞最多,略大于红细胞。核大而圆,几乎占据整个细胞，染成深蓝紫色。胞质极少，仅在核的一侧出现一线状天蓝色或淡蓝色的胞质。中淋巴细胞比红细胞大，胞质较小淋巴细胞的稍多，着色较浅。核圆形或卵圆形，位于细胞中