正交试验优选荔枝草中总黄酮的提取工艺 (2)

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1、正交试验优选荔枝草中总黄酮的提取工艺摘要目的：针对从荔枝草中提取总黄酮的操作工艺进行提升优化。方法：采用紫外分光光度法对荔枝草中总黄酮的含量进行检测，同时考察相关因素如溶剂浓度、溶剂用量、提取温度、提取时间等对结果的影响。结果：添加20倍量的70%C2H5OH，80℃提取120min，总黄酮提取率为6.86%。结论：优化后的提取工艺整体简便、准确、重复性好，在实际生产活动中具有良好应用价值，可用于工业提取总黄酮。关键词荔枝草；正交试验；总黄酮；提取工艺引言荔枝草属于唇形科鼠尾草属植物，针对荔枝草的现代研究结果显示其含有多种成分，主要成分包括黄酮、木质素、酚类、挥发油和甾醇等各种成分[1]

2、。本人通过文献得知，荔枝草中主要成分为黄酮，预实验发现总黄酮中含有芦丁，拟以芦丁为检测指标，对荔枝草中总黄酮的含量进行测定。荔枝草性凉，在医药方面的作用主要包括清热解毒、凉血利尿、消除水肿等；同时还可以用来治疗痔疮肿痛、乳腺炎、出血等，同时针对跌打损伤也具有良好效果[2]；荔枝草可以用于多种疾病的治疗，临床上常用于急性扁桃体炎、宫颈糜烂等。[3]。本文主要通过单因素试验和正交试验，分析相关因素如溶剂浓度、温度、提取时间、温度等对结果的影响，从而找出最优提取方案。。1材料1.1仪器1.2试药荔枝草药品来自于广西大明山，芦丁，试剂等均为分析纯。2方法和结果2.1总黄酮含量测定122.1.1对

3、照品芦丁溶液的制备称取10.9mg的芦丁样品，将其放入容量瓶中，滴加70%C2H5OH，将标准品进行超声溶解，完成超声溶解后，用C2H5OH溶液定容至刻度线，最终得到芦丁标准品溶液。2.1.2供试品溶液的制备准确称取2g荔枝草全草，撕碎后放入500mL的圆底烧瓶中，称取20mL70%C2H5OH溶液加入圆底烧瓶，之后将烧瓶置于水浴锅上连续回流提取2次，每次反应1.5h，结束后趁热滤过，合并滤液并稀释，倒入100mL的容量瓶中，用C2H5OH溶液定容至刻度线，即得到样品待测液。2.1.3最大吸收波长的选择分别准确地吸取一定量的荔枝草提取液、对照品溶液和70%C2H5OH溶液，并分别放置于三

4、个25mL量瓶中，首先在各容量瓶中加入1.0mL的5％NaNO2，混均后静置6min，再分别滴加入1.0mL10％的Al(NO3)3，上下摇匀后静置6min，再依次加入10.0mL4%的NaOH溶液，最后用70%C2H5OH溶液定容至容量瓶的刻度线，后放置15min。将配制好的溶液按照紫外可分光光度法进行试验，在400～700nm的波长范围内扫描。结果表明，荔枝草提取液在500nm波长处存在最大吸收峰，芦丁溶液在502nm波长处存在最大吸收峰，空白对照样品在此处不存在吸收峰，所以确定最大吸收波长为500nm（图A、B、C）。122.1.4标准曲线的制作吸取芦丁对照品溶液，第一次吸取1ml

5、，第二次2ml，第三次4ml，依次上升到8ml，将其分别滴入5个容量瓶中，在此之前先将1.0mL5％的NaNO2滴加入各容量瓶中，混合均匀后静置6min，然后再在容量瓶中分别滴加入10％的Al(NO3)3各1.0mL，摇晃容量瓶，促使内部溶液均匀，然后静置容量瓶，时间为6分钟；加入10.0mL4%的NaOH，加入70%的乙醇溶液定容，达到容量瓶刻度线，再次摇晃容量瓶，溶液均匀后，静置15min。同时制备空白实验进行对照，在吸收波长为500nm处测定吸光度（A），平行测试取平均值。以芦丁对照品溶液的质量浓度（c）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制标准曲线，根据实验结果，得到回归方程为A=

6、0.0111c+0.0085(R=0.9991，n=5）。表1-1为测定的吸光度，图1-1为绘制的标准曲线。表1-1芦丁标准吸光度122.1.5精密度试验对五份芦丁对照品溶液进行显色，记录5次吸光度，取平均值，RSD=0.4％（<2%），结果见表1-2。表1-2精密度试验2.1.6稳定性试验准确吸取1mL荔枝草溶液滴加于25mL容量瓶中，按2.1.3项显色后，存放在室温下，在0，10，20，30，40，50，60min后，测定荔枝草溶液吸光度，RSD＝0.62%（<2%）。实验结果显示，在60min内，荔枝草溶液中总黄酮含量能稳定显色，结果如表1-3所示。表1-3稳定性试验122.1.7

7、重复性试验称量6份荔枝草药材样品，每份1g，测定吸光度6次，RSD=0.12%（<2%），表1-4为重复性实验结果。表1-4重复性试验2.1.8加样回收率试验称取一定量荔枝草样品，加入一定量芦丁对照品，总共测定6份样品，表1-5为加样回收率结果。12表1-5加样回收率试验2.2单因素法优选总黄酮提取工艺2.2.1乙醇浓度对总黄酮含量的影响将提取温度控制在80℃，料液比为1：10，提取时间为1.5h，在这一条件下分别称取5份8g的荔枝