桔梗等植物降血糖功能评价及其相关机理研究

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1、中文摘要现代高血糖日益严重地危害着人们的健康。研究开发低成本，高效，拥有自主知识产权的血糖调节功能性食品，具有重要的社会和经济效益。本项目是研究室在高血糖功能食品研究领域选择的一个长期规划课题，利用体外细胞筛选得到较理想的降血糖植物，进一步开展动物体内实验评价，本论文中包括了细胞筛选实验，高血糖模型诱导方法，动物体内长短期综合评价等一些基础工作，希望能为本项目后期更加深入的研究开创积累一些实验条件。本论文采用两步灌流方法得到大鼠原代肝细胞和胰岛素抵抗肝细胞模型，通过测定桔梗等43种植物提取物对细胞的葡萄糖转运的影响作用，筛选出桔梗，黄芪等多种降血糖植物。通

2、过研究链脲菌素高血糖模型诱导方法得到稳定可靠的高血糖小鼠试验模型，利用高血糖小鼠模型研究桔梗、黄芪、苦瓜和玉米须四种植物的长短期灌胃后降血糖效果评价，分析血糖，血脂、胰岛素抵抗、氧化应激等类指标，评价四种植物的血糖调节效果和相关机理。同时研究了桔梗及其分离样品对o．葡萄糖苷酶抑制效果．首先通过反复试验，在机械方法的基础上，采用两步灌流方法得到大鼠原代肝细胞和胰岛素抵抗肝细胞模型，选择桔梗等43种植物提取液，比较其对原代肝细胞和胰岛寨抵抗肝细胞模型的葡萄糖转运的影响效果。试验筛选得到夏枯草，玉米须，桑叶，玄参，翻白草，桔梗。黄芪，苦瓜，五味子等植物提取液，对

3、葡萄糖转运促进作用明显．高血糖动物模型诱导试验中，采用总剂量80、90、100mg／kgb．w．链脲菌素STZ分两次注射和一次注射对于模型成功小鼠胰岛B细胞的病理改变无明显差异，且其受损程度较120、140mg／kgb．w．STZ组轻。多组均出现甘油三酯TG、总胆固醇TC、低密度脂蛋白胆固酵LDL-C升高、高密度脂蛋白胆固醇HDL-C下降的脂质代谢紊乱现象，且连续两天注射比一次注射严重，与小鼠平均血糖变化一致。采用90或100mg／kgb．w．STZ分两天连续给30-339ICR小鼠尾静脉注射，第3天即可出现高血糖症状，第6天模型稳定。高血糖小鼠血糖范围3

4、50-500mg／dL，并伴随脂质代谢异常，模型成功率高，死亡率低。后续试验选择总剂量90mg／kgbwSTZ分两天连续注射的方法诱发高血糖模型小鼠，为后期的动物长短期评价提供了可靠的动物模型。高血糖小鼠经过28d连续给予桔梗等植物提取物，体重减轻的症状有所缓解，并且控制了糖尿病小鼠的采食量、采水量。桔梗等植物提取物可以抑制高血糖小鼠肝脏、肾脏和脾脏发生肿大．桔梗等植物提取物可以控制高血糖小鼠血塘的不断升高，刺激胰岛素分泌，并且肝糖原合成和肝葡萄耱激酶活性都有所增加，与模型组比有显著性差异。桔梗等植物提取物降低了高血糖小鼠血清中甘油三酯(1’G)、总胆固醇

5、仃c)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量并增加了高密度脂蛋白胆固醇(HOL-O含量，具有调节高血糖小鼠脂质代谢紊乱功能。桔梗等植物提取物降低了血清中脂质过氧化的终末产物丙二醛(MDA)含量，提高了抗氧化酶(超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力，可改善高血糖小鼠的氧化应激。桔梗等植物提取物可改善高血糖小鼠糖代谢、脂代谢紊乱，增加机体抗氧化酶活性，提示桔梗等植物提取物对高血糖及其产生的氧化应激有较好的改善作用。中国农业大学博士学位轮文摘要一Abstract本试验首次采用链脲菌素致高血糖ICR小鼠来观察桔梗

6、等植物提取物对高血糖模型小鼠短期血糖的影响．实验结果显示桔梗，黄芪和苦瓜对高血糖小鼠糖耐量水平有明显的抑制作用，在3h短期血糖实验中，四种植物提取物抑制作用并不十分明显，对外源胰岛素敏感性的影响作用主要集中在HPE和HME两组，其延长了外源胰岛素的作用效果，提高了其敏感性。除了LAE组使内源胰岛素含量增加13．5％之外，其他组并没有促进内源胰岛素分泌的作用。分别建立n．葡萄糖苷酶纯酶抑制试验和小肠内a．葡萄糖苷酶抑制试验评价方法，指导对桔梗提取物的分离试验，采用多种极性溶剂萃取桔梗乙醇提取物中的抑制活性样品，采用HPDl00树脂和SephadexLH-20

7、层析方法复合洗脱得到抑制活性较强的分离样品，分别以n．葡萄糖苷酶纯酶和小肠内a．葡萄糖苷酶进行抑制试验，确定其抑制作用样品。关键词：降血糖，筛选，a．葡萄糖苷酶，桔梗，黄芪，苦瓜，玉米须ⅡAbstractTheaimsofthispaperwe他tostudyingOilscreeningofantihyperglycemicplantswithnormalandinsulinresistancehepatocyteinvitroandeffectsofplantsextractsonthemetabolismofglucose，lipidandoxida

8、tivestress,andeffectsof#antsextra