菲在土壤中的微生物降解研究

《菲在土壤中的微生物降解研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、生态环境学报2010,19(2):330-333http://www.jeesci.comEcologyandEnvironmentalSciencesE-mail:editor@jeesci.com菲在土壤中的微生物降解研究111112张卫，林匡飞，张巍，龙亿涛，刘莉莉，王学东1.华东理工大学资源与环境工程学院//国家环境保护化工过程环境风险评价与控制重点实验室，上海200237；2.温州医学院环境与公共卫生学院，浙江温州325035摘要：研究了不同条件土壤中多环芳烃菲的降解动态。结果表明：温度和底物浓度对土壤中菲

2、的降解有较大影响，未灭菌土壤中菲的降解半衰期为5.1d；从污染土壤中分离到一株高效降解菲的菌株，经16SrDNA鉴定为产碱杆菌属（Alcaligenes3+2+2+bacteriumLBM.），同源性高达99%；随着优势菌接种量增加，基础培养基中菲降解速率逐渐加快；Fe、Co和Cu对优势3+菌降解菲能力均有不同程度影响，其中以Fe影响最明显。关键词：菲；土壤；微生物降解；优势菌中图分类号：X172文献标识码：A文章编号：1674-5906（2010）02-0330-04多环芳烃（PAHs）是一类广泛存在于环境中的1.

3、4菲含量检测有毒有机污染物，主要来源于能源利用过程等人类采用高效液相色谱仪对菲浓度进行测定。V(流-1活动和森林火灾、火山活动等自然过程。由于许多动相甲醇)∶V(水)=90∶10，流速1.5mL·min，检PAHs具有致癌、致畸、致突变作用，对人体健康危测波长278nm，进样量20μL，按外标峰面积法定[1]害极大。菲作为PAHs典型代表，在土壤中含量正量。在上述条件下，菲保留时间为3.2min。[2]日益增加，已严重威胁到环境安全。微生物作用1.5优势菌鉴定是环境中菲去除的重要途径，利用其对菲污染土壤PCR反应引物

4、选择通用引物。其中正向引物[3-6]开展生物修复已显示出光明前景。本文选择上海BSF8/20：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’市焦化厂污染土壤作为研究对象，重点研究了菲在(Escherichiacoli)；反向引物BSR1541/20：不同土壤中的降解，并从中分离到一株高效降解菲5’-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3’(Es-的新型菌株，为最终开展菲污染土壤的现场修复提cherichiacoli)。反应体系（100μL）：10×PCR缓冲-1供了良好菌源。液5μL，MgCL2（0.02

5、5moL·L）4μL，dNTP2μL，1材料和方法引物BSF8/20和BSR1541/20各1.5μL，模板DNA-11.1主要仪器和试剂1μL，Taq酶（10000U·mL）0.5μL，重蒸水34.5[7]高效液相色谱仪（DAD检测器）、超净工作台、μL，甘油50μL。反应程序：①94℃2min；②94高压灭菌锅、摇床和旋转蒸发仪等仪器，甲醇为℃1min，56℃1min，72℃2min；③第2步循环HPLC级，其它试剂均为A.R.级。29次；④72℃10min；⑤4℃10min；⑥室温放置[8]1.2供试土壤样品。

6、PCR产物纯化和测序由上海基康生物技术有限供试土壤样品采自上海市焦化厂重污染区责任公司完成。（5~10cm深度土层），除去砂砾等杂物，风干，碾1.6接种量对菲降解的影响碎，过40目筛，加入适量蒸馏水（使含水量为田分别吸取0.5、1.0、1.5和2.0mL10%的优势-1间最大持水量的60%），备用。菌菌悬液，接种到含50mg·L菲的20mL基础培-11.3菲在不同条件土壤中的降解养基（MSM）中，30℃150r·min振荡培养，每取20g备用土壤放入200mL锥型瓶中，按一个处理设4次重复，一定时间后取样检测菲含量。

7、定浓度加入适量菲母液，样品混匀。2结果与分析处理1：分别对温度和底物浓度进行单因子条2.1菲检测标准曲线件试验，一定时间后取样检测菲含量。利用色谱甲醇配制不同浓度菲溶液（5、10、-1处理2：分别将样品作灭菌及未灭菌处理，一20、50、100、200和500mg·L），根据检测结果定时间后取样检测菲含量。绘制标准曲线（见图1）。由图1可知，线性方程基金项目：国家自然科学基金项目（40901148）；国家高技术研究发展计划（2008AA06A406）；温州市重大科技专项（Z090921421）；华东理工大学基本科研业务

8、费专项基金（WB0911011）作者简介：张卫(1974年生)，男，副教授，博士，主要从事污染生态修复研究。E-mail:wzhang@ecust.edu.cn收稿日期：2009-07-21张卫等：菲在土壤中的微生物降解研究33125000000表3灭菌与未灭菌土壤中菲的降解动态Table3Phenanthrenedegradationdyna