细胞生物学研究相关仪器设备简介2012

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1、细胞生物学研究方法与技术仪器学习的要点用于细胞生物弄懂原理掌握结构了解应用学研究的常用仪器设备介绍知道怎么准能严谨操作知道该仪器备实验样品，降低仪器对能做什么实验能充分理解实验的干扰了解各种仪并自己分析改能分析仪器器的长处及不2012-9-14进实验结果故障的原因足细胞生物学研究方法与技术细胞生物学研究常用仪器感兴趣的细胞第一节：观察细胞形态结构的设备光镜、电镜1、光学显微镜共焦显微镜、流式2、电子显微镜观察、鉴定、分离流式、磁珠分选、离心ELISPOT、液相芯片、活细胞工作站功能细胞生物学研究方法与技术细胞生物学研究方法与技术1

2、一、光学显微镜知识物镜的数值孔径光学显微镜最重要的原件——物镜数值孔径numericapeture（NA）1、数值孔径（NA,numericapeture）1、定义：指物镜框口能纳进的光通量的大小。数值孔径越性能大则进入物镜的光越亮，物镜成像越清晰，镜头越好。2、分辨率（）参数3、放大倍数,工作距离,视场直径,等等2、计算公式：NA=·sin/2NA与介质的折射率和物镜的框口夹角有关。1、相差等特殊记载材质折射率2、矫正相差和色差的能力介介质折射率的相对性真空1.00003、放大倍数、数值孔径、介质质•真空中光速最大，折射率最小

3、空气1.0003折•同一媒质对波长小的光折射率大4、镜筒、盖玻片厚度水1.3335、放大倍数颜色标志射玻璃1.5~1.9率注意物镜对介质的要求！香柏油1.518细胞生物学研究方法与技术细胞生物学研究方法与技术物镜的其他性能参数光学显微镜的种类与应用分辨率resolution从工作原理分从视觉效果分1、定义：指物镜能够分辨的两质点间的最小距离（）。当两质点无限接近时，显微镜就将其认为是一个质点了，因明场（BF）此，物镜分辨率越小，显微镜的质量越好。几何光学显微镜暗场（DF)2、计算公式：（入射光波长）=0.61—————————相差（P

4、H）NA（数值孔径）物理光学显微镜微分干涉（DIC）分辨率也与数值孔径相关放大倍数浮雕相衬（RC）分为低倍(4×)、中倍(10×或20×)、高倍(40×)和油浸物镜(100×)荧光显微镜（FL）信息转换显微镜实际放大倍数：目镜的放大倍数乘以物镜的放大倍数激光共聚焦显微镜细胞生物学研究方法与技术细胞生物学研究方法与技术2几何光学显微镜物理光学显微镜【明视野观察】【暗视野观察】【相差显微镜】【微分干涉显微镜/DIC】最常见的透射光显微镜模式。入射光斜射，通过被检又可分为正置显微镜和倒置显物体的反射光或衍射光进行观察。消除了强光微镜。直射时因强光

5、绕射造成的人眼观察不到效果。处理透过光，把肉眼不可见的光程差，变成肉眼可见的振幅差（明暗），从而看到活细胞内一些结构。处理入射光，通过特殊棱镜，使图像呈现三维立体效果。细胞生物学研究方法与技术细胞生物学研究方法与技术信息转换显微镜荧光显微镜：基于荧光染料特异性标记的显微镜分辨率高；多信息同时标记；定位定性定量细胞生物学研究方法与技术细胞生物学研究方法与技术3双/多光子显微镜二、电子显微镜简介f1、电镜与光镜的区别•原理：照射光波长大于或等Virtuallevel电镜光镜Absorbed于荧光染料激发波长2倍，但photonFluorescen

6、ce是能量极高(2KW)，在超短时光源电子束，波长短可见光间内(兆分之一秒)聚焦,使聚焦点瞬间产生高密度光子,出光路电磁透镜光学配件现荧光染料吸收双/多光子能分辨率0.2nm0.2um量而发射荧光。2、电镜最常用类型及主要应用•优点：双/多光子吸收仅发生在聚焦点,避免了焦点外激发扫描电镜透射电镜而产生的光漂白现象；高能观察内容表面结构内部结构量、超短脉冲聚焦、使入射光穿透性更强，能观察到较一般扫描超薄切片厚样品的结构。常用方法冷冻蚀刻负染细胞生物学研究方法与技术细胞生物学研究方法与技术扫描电镜透射电镜观察样本表面电镜受电子束穿透能力的限完整

7、细胞细胞断面冷冻蚀刻制，必须把标本切成厚度小于将冷冻断裂的样品的0.1um的薄片才适用，这种薄温度升高，让样品中片称为超薄切片。淋巴细胞的冰在真空中升华，而在表面上浮雕出细电镜的实际分辨率与切片的胞膜的超微结构。而后对浮雕表面进行铂厚度相关，实际分辨率=切片碳复型。厚度的1/10红细胞细胞直径：20um超薄切片：40~50nm分辨率：4~5nm（观察亚细胞结构）大肠杆菌细胞生物学研究方法与技术细胞生物学研究方法与技术4透射电镜的主要制样技术第一节重点负染技术：用重金属盐对铺展在载网上的样品染色，吸去多余染料，干燥后，使样品凹陷处铺上一层重金

8、属盐，从而出现负染效果，分辨率可1.光镜：达1.5nm左右。①物镜的重要参数及意义主要用于观察病毒、大分子蛋白形态结构②不同种类光镜及应用2.电镜：①最常用的两种类