青钱柳种子无菌萌发研究

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1、青钱柳种子无菌萌发研究【摘要】目的探讨不同处理方式对青钱柳种子无菌萌发的影响。方法浓硫酸对种子进行预处理后，采用正交设计对影响其萌发的GA3浓度、浸种温度和浸种时间进行研究，再将外植体进行消毒，接种于不同激素组合的MS培养基中进行无菌培养。结果青钱柳种子萌发的最佳处理为：浓硫酸酸蚀9.5h+1000mg/L的GA3溶液+浸种24h+浸种温度35℃;种子萌发的最优激素组合为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+GA330mg/L;对青钱柳幼苗进行离体培养，液体培养基比固体培养基更有利

2、于青钱柳的离体培养。结论对青钱柳种子进行了综合处理再进行无菌培养，可以提高青钱柳种子的发芽率。【关键词】青钱柳种子;激素;萌发;无菌培养　青钱柳Cyclocaryapaliurus(Batal.)Iljinskaja又名摇钱树、山沟树(浙江)、麻柳(湖北)、青钱李等，系胡桃科青钱柳属植物，为我国特有的珍稀树种，是国家重点保护的濒危植物之一[1，2]，在广西桂林等地也有分布。青钱柳有降血糖、降血压、降血脂等作用，被认为是治疗2型糖尿病的安全低毒的良药。　　现有的青钱柳多零星分布于深山老林和一些自然保

3、护区中，主要是天然林，青钱柳种子发育差，8种子败育很严重且具有深休眠特性，人工育苗出苗率低，一般播种后需隔年甚至2年后才萌发[3]，坚硬种壳是阻碍种子萌发的因素之一[4]，这在一定程度上制约了青钱柳人工资源的培育和开发利用，严重影响了青钱柳的开发与产业化进程。目前有关青钱柳种子萌发的研究报道并不多，本试验以青钱柳种子为外植体，采用浓硫酸软化种子种壳，结合赤霉素浸泡后进行无菌培养，探讨浓硫酸、赤霉素综合处理及培养基激素等因素对青钱柳种子萌发的影响，探讨提高青钱柳种子发芽率的方法。　　1材料　　青钱柳

4、种子由桂林医学院药理教研室提供(2005年采集于桂林资源县中峰乡野生青钱柳植株)。　　2方法　　2.1种子的预处理4℃条件下，用浓硫酸分别浸泡种子4.5，9.5，13.5h，自来水下将种子表面黑色碳化物搓洗干净，经消毒后接种于不含激素的固体培养基中，以清水浸种作为对照。　　2.2种子的综合处理采用正交实验设计，对GA3浓度、浸种时间和浸种温度均设3个水平，分别为：GA3浓度设100，500，1000mg/L;GA3浸种时间设12，24，48h;浸种温度设5，25，35℃。种子综合处理方案见表2。8

5、　　2.3种子的消毒和接种将处理过的种子用清水洗净，于75%酒精中浸泡1min，转入0.1%升汞浸泡15min，无菌水清洗4次后，接入培养基，每一处理接种20颗种子。　　2.4初代培养培养基为固体培养基，激素组合采用正交实验设计，设计方案见表3。　　2.5继代培养当青钱柳幼苗长至4～6cm高时，将根尖和萌发芽剪下(长度约为2cm左右)，分别接入激素水平为6BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L的固体培养基和液体培养基中。　　2.6培养基的设计MS为基本培养基，附加3%的蔗糖，固体培养基附加0.

6、7%的琼脂，培养基灭菌前将pH值调至5.8～6.0。　　2.7培养条件接种后先进行暗培养，种子萌芽后转为光照培养，光照时间12h/d，光强1500～2000Lx，培养温度为(25±0.5)℃。　　2.8实验结果的统计和计算每一处理在接种后定期观察、记录种子的污染情况和生长情况，分别记录接种20，40，60d种子的发芽情况，接种608d时统计发芽率：发芽率(%)=萌芽种子数/未受污染的接种数×100%。　　3结果　　3.1浓硫酸酸蚀时间对青钱柳种子萌发的影响青钱柳不经酸蚀，种壳对种子的萌发产生了很大

7、的阻力，发芽率为0(结果见表1)。用浓硫酸进行不同时间的酸蚀后，酸蚀4.5，9.5h两个处理中均有种子发芽，以9.5h的发芽率最高，说明在一定范围内，随酸蚀时间的延长，种子的发芽率升高，但酸蚀时间过长，酸蚀13.5h，会导致种子胚的损坏，最终导致种子无法萌发。表1浓硫酸对青钱柳种子萌发的影响　　3.2不同浓度GA3、浸种时间和浸种温度对青钱柳种子萌发的影响不同浓度的GA3浸种可显著促进种子萌发，有效解除种子休眠[5]。正交实验结果表明，综合处理可促进种子萌发，但发芽时间和发芽率有差异，A8处理的青

8、钱柳种子发芽时间最早，17d就可以看到种子发芽，60d时发芽率可达42.11%，A9处理发芽时间最迟，1个月才发芽，且发芽率仅为10.53%(见表2)，说明A8处理能较快地打破青钱柳种子休眠和提高青钱柳的发芽率;极差分析表明，GA3浓度产生影响的极差最大，浸种温度的极差值最小，浸种时间次之，说明GA3的浓度对青钱柳种子发芽率影响最大，温度对青钱柳种子的发芽率影响最小，优化组合为GA31000mg/L+浸种24h+浸种温度35℃。　　3.38不同激素种类及浓度对青钱柳种子萌发的影响不