实验十三、霉菌形态观察

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1、霉菌的形态观察水生态工程实验室－YJH目的要求学习并掌握观察霉菌形态的基本方法了解四类常见霉菌的基本形态特征水生态工程实验室－YJH霉菌霉菌是丝状真菌，可产生复杂分枝的菌丝体；菌丝体分为基内菌丝体和气生菌丝体；气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝；繁殖菌丝产生孢子；霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据；霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多(约为3～10μm),常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍,因此用低倍镜即可观察。水生态工程实验室－YJH霉菌的培养特征菌落特征：霉菌的菌落大、疏松

2、、干燥、不透明，多呈绒毛状、絮状或网状等，菌体可沿培养基表面蔓延生长，由于不同的真菌孢子含有不同的色素，所以菌落可呈红、黄、绿、青绿、青灰、黑、白、灰等多种颜色。水生态工程实验室－YJH霉菌菌丝有隔菌丝无隔菌丝水生态工程实验室－YJH霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，而且孢子很容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。此染色液制成的霉菌标本片其特点是：(a)细胞不变形；(b)具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长时间；(c)溶液本身呈蓝色，有一定染色效果。为了观察霉菌清晰、完整、保持自然状态的形态，可利用玻璃纸透析培

3、养法进行观察。此法是利用玻璃纸的半透膜特性及透光性，将霉菌生长在覆盖于琼脂培养基表面的玻璃纸上，然后将长菌的玻璃纸剪取一小片，贴放在载玻片上用显微镜观察。基本原理水生态工程实验室－YJH毛霉菌丝无隔无性生殖：孢囊孢子有性生殖：接合孢子无囊托，有囊领无假根水生态工程实验室－YJH根霉菌丝无隔无性生殖：孢囊孢子有性生殖：接合孢子有囊托有假根水生态工程实验室－YJH曲霉菌丝有隔无性生殖：分生孢子有性生殖：暂未发现分生孢子梗：头状足细胞水生态工程实验室－YJH青霉菌丝有隔无性生殖：分生孢子有性生殖：暂未发现分生孢子梗：分支状水生态

4、工程实验室－YJH材料菌种培养基PDA培养基溶液或试剂乳酸石炭酸棉蓝染色液仪器或其他用具水生态工程实验室－YJH操作步骤水浸片观察法玻璃纸法水生态工程实验室－YJH观察要求先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜；注意观察菌丝有无隔膜；有无假根、足细胞等特殊形态的菌丝；注意其无性繁殖器官的形状和构造；孢子着生的方式和孢子的形态、大小等。水生态工程实验室－YJH水浸片观察法在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液或蒸馏水，用解剖针从生长有霉菌的平板中挑取少量带有孢子的霉菌菌丝，用50%的乙醇浸润，再用蒸馏水将浸过的菌丝洗一下，然后放入

5、载玻片上的液滴中，仔细地用解剖针将菌丝分散开来。盖上盖玻片（勿使产生气泡，且不要再移动盖玻片），先用低倍镜，必要时转换高倍镜镜检并记录观察结果。水生态工程实验室－YJH玻璃纸观察法玻璃纸的选择与处理 要选择能够允许营养物质透过的玻璃纸。也可收集商品包装用的玻璃纸，加水煮沸，然后用冷水冲洗。经此处理后的玻璃纸若变硬，必定是不可用的，只有那些软的可用。将那些可用的玻璃纸剪成适当大小，用水浸湿后，夹于旧报纸中，然后一起放入平皿内121℃灭菌30min备用。菌种的培养 按无菌操作法，倒平板，冷凝后用灭菌的镊子夹取无菌玻璃纸贴附于平

6、板上，再用接种环沾取少许霉菌孢子，在玻璃纸上方轻轻抖落于纸上。然后将平板置28—30℃下培养3—5天，曲霉菌和青霉菌即可在玻璃纸上长出单个菌落（根霉菌的气生性强，形成的菌落铺满整个平板）。制片与观察 剪取玻璃纸透析法培养3—4天后长有菌丝和孢子的玻璃纸一小块，先放在50%乙醇中浸一下，洗掉脱落下来的孢子，并赶走菌体上的气泡，然后正面向上贴附于干净载玻片上，滴加1—2滴乳酸石炭酸棉蓝液，小心地盖上盖玻片（注意不要产生气泡），且不要移动盖玻片，以免搞乱菌丝。水生态工程实验室－YJH水生态工程实验室－YJH无隔菌丝水生态工程实验

7、室－YJH有隔菌丝水生态工程实验室－YJH毛霉与根霉水生态工程实验室－YJH青霉分生孢子分生孢子梗小梗梗基副枝水生态工程实验室－YJH曲霉分生孢子次生小梗初生小梗顶囊分生孢子梗足细胞水生态工程实验室－YJH