3.2月季的花药培养

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1、花中皇后—月季又称“月月红”，自然花期5至11月课题2月季的花药培养被子植物的花花药花丝雄蕊柱头花柱子房萼片胚珠花瓣花托雌蕊图1花的基本结构（一）被子植物的花粉发育1.雄蕊一、基础知识由花粉母细胞先经过减数分裂，后经过有丝分裂形成的单倍体的生殖细胞.花药：囊状结构，内有很多花粉花丝2.花粉的概念:3.花粉发育阶段：小孢子四分体时期；单核期；双核期4.花粉的发育过程思考：1.被子植物花粉发育过程中的四分体时期与减数分裂的四分体时期是同一阶段吗？小孢子四分体时期小孢子母细胞(2n)()时期(n)单核()期(n)

2、双核期(n)()细胞核(n)()细胞核(n)()细胞(n)()细胞(n)（)个精子(n)()分裂()分裂单核()期(n)()分裂减数小孢子四分体居中靠边有丝生殖生殖花粉管营养有丝24.花粉的发育过程二、产生花粉植株的两种途径①②移栽花药中的花粉胚状体脱分化愈伤组织花药中的花粉脱分化分化丛芽再分化丛芽诱导生根体细胞胚（胚状体）：在组织培养过程中，某些细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似，胚芽，胚轴，胚根等结构完整，就像一颗种子两种途径产生的原因：培养基中的激素种类及浓度配比

3、1、产生花粉植株的两种途径2、花粉植株的特点单倍体植株，植株弱小，高度不育3、植物的花药培养在育种上的意义花粉经过培养发育成单倍体植株，单倍体植株经过人工处理后，染色体数目加倍，重新恢复到正常植株的染色体数目，这样的植株不仅可以正常生殖，而且每对染色体上的基因都是纯合的，自交后代不会发生性状分离，这就是单倍体育种。三、影响花药培养的因素阅读P38-39思考：诱导花粉植株能否成功及诱导成功的高低，主要影响因素是____________和___________-材料的选择培养基的组成a.材料选择什么时期最好，为

4、什么？b.如何选择单核期细胞？c.为什么花瓣松动会给消毒带来困难？d.还有哪些影响花药培养的因素？花期为初花期，花粉发育在单核靠边期，成功率最高。亲本植株的生长条件，材料的预处理及接种密度等选择完全未开放的花蕾微生物可能侵入花药，给材料消毒带来困难2、培养基的组成花药培养所采用的培养基根据植物的不同而发生变化。在各营养成分中，植物生长调节剂的浓度和配比，常对诱导细胞的分裂、生长和分化起决定性作用。3、预处理为取得好的结果，常在花药接种前对其进行预处理。花药和花粉的预处理措施主要是低温。在很多情况下，低温处理

5、可明显提高其培养的效果。四、月季花药培养的实验操作1、月季的花药培养过程（1）材料的选取（2）材料的消毒（3）接种和培养（4）鉴定和筛选（1）材料选取②通过来_____确定是否处于适宜的发育期。方法：醋酸洋红法(将染色体染成红色)焙花青-铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色)。①从花药看：从花粉看：从花蕾看：花药（载玻片上）→1%的醋酸洋红1滴→用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成红色）花药（在卡诺氏固定液中处理20min）→取出，置于载玻片上→焙花青－铬矾溶液染色→盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细

6、胞核被染成蓝黑色）月季的初花期单核靠边期完全未开放的镜检在月季的初花期（5月初到5月中旬）花蕾0.1%的氯化汞溶液2~4min70%的酒精(大约30s)无菌水(清洗)无菌水冲洗3~5次（2）材料的消毒无菌吸水纸吸干（3）接种和培养接种：消毒后的花蕾，要在无菌条件下去除萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。通常每瓶接种花药7—10个培养：25℃左右无需光照，20—30d愈伤组织胚状体幼小植株幼小植株花药转移至分化培养基先分开，再转移至分化培养基光照培养，形成试管苗（3）接种和培养注意的问题①损伤花药，容易从

7、受伤部位产生愈伤组织，即得不到单倍体③在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，染色体组的数目常常会发生变化.（主要原因是营养核和生殖核融合造成的）所以还需要对培养出来的植株作进一步的鉴定和筛选。思考：1、为何不能损伤花药且要彻底去除花丝？2、培养时需要注意哪些事项？①每瓶接种花药7~10个，温度控制在250C左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。②花药开裂长出愈伤组织或释放胚状体。长出愈伤组织要及时转移到分化培养基上，释放的胚状体，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，否则这些植株将很难分开②因

8、为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。（4）鉴定和筛选染色体倍性的变化：花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常会出现染色体倍性的变化，需要对培养出来的植株进行鉴定和筛选。思考：在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，染色体组的数目究竟会发生怎样的变化？提示：体细胞和花药细胞的染色体数目去思考2、课题成果评价（1）选材是否恰当选材是否成功是花药培养成功的关键。应学会通过显微镜观察处于适宜