[整理]实验6血红蛋白含量测定

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1、实验6血红蛋口含量的测定（必修）酸化血红蛋口稀释测定法（改良沙利氏法）［目的与原理］掌握测定他类血红蛋口含量的原理和方法，应用改良沙利氏法测定不同血类血红蛋口含量。本实验是应用比色法测定鱼的血红蛋白量。血红蛋白木身的色泽，常随所结合的氧量多少而改变，不便比色。但是加入稀盐酸于血液中可使血红蛋口变成不易变色的高铁血红蛋白，这就町以与标准色相比，从而测出其含量。通常以100ml血液中含血红蛋白克数来表示，正常鱼血红蛋白含蜃为7—8go［实验对象］鲤、鲫或草鱼。［试剂与器材］血红蛋口比色计，搪瓷盘，注射器，凹瓷盘，小试管，试管

2、架，蒸係水，75%酒精，棉球，O.lmol/L盐酸（配置盐酸用具），蒸镉水，滴管，纱布，烧杯，抗凝剂（1%肝素钠溶液或10%草酸钾溶液）。［实验步骤11、了解血红蛋白比色计的构成血红蛋白计主要包括吸血管、比色计和比色管等部件。吸血管为一厚捲毛细玻璃管，具上有10卩1、20U1的刻度，尾端连有橡皮头，供吸血川。比色计的两侧，装有标准浓度的高铁血红蛋口溶液，也有用比色玻璃柱（或片）來代替的。比色管可插在比色计中，与两侧的标准比色柱进行比色。比色管的两侧通常刻冇两行刻度。一行为血红蛋白的绝对值，以g计数（每100毫升血液中所含

3、血红蛋白的克数）来表示，刻度范围为2〜22。另一行为血红蛋白和对值，以％（即相当于正常平均值的百分数）來表示,刻度范围为10%〜160%o目前测定常用绝对值来表示。2、用蒸锚水将比色管洗净，吸血管则依次用蒸啊水，95%酒精和乙醴洗净干燥备用。3、用滴管加0.1mol/L盐酸4-6滴到刻度比色管内,约加到管下端刻度“2”或“10%”处为止。4、采血：采血方法见实验49,用吸血管吸血至20U1刻度（要准确）。用绵球仔细将管尖端外面的血拭去。5、将吸血管中血液轻轻地滴到比色管中盐酸底部，并用上层较清的盐酸溶液反复清洗吸血管3次

4、。使吸血管内的血液完全洗净。切勿带入空气，以至形成气泡影响比色。吸血管尖端残留的液体，应在比色管内樂上沥净。取出吸血管后，轻轻摇动比色管使血液与盐酸充分混合，静置15分钟使管内的盐酸和血红蛋白作用完全，形成棕色的高铁血红蛋白。6、把比色管插入标准比色架两色柱中央的空格中，使无刻度的两侧面位于空格的前后方，便于透光和比色。7、卅吸管将蒸锦水逐滴地加入比色管内，每加一滴都应充分混匀并观察比色管内的颜色，总到比色管内溶液的色度和血红蛋口计上标准色度相同吋为准，读出管内液而所在的刻度数，（读数应以溶液凹面最低点相一致的刻度为佳）

5、。即为每100ml血液中所含血红蛋白的克数（用g/100ml表示）。8、实验完毕应将吸血管和比色管洗净，放回盒内。［方法评估］采用目视比色法测定血红蛋白含量是比较常用及简便的方法，但此法误差较大，而且同仪器的准确度有关。［应用意义］血红蛋口含量与年龄、性别、性周期、营养状况、活动情况、季节变化等有关，营养不良或长期饥饿可引起血红蛋口量显苦降低。［注意事项11、用吸血管吸血过程应仔细、认真，准确把握住吸入的血液最是初学者的一个难点，也是实验结果准确与否的一个关键。2、血红蛋白吸管很容易被损坏，应妥善爱护。管内有凝血块时不可

6、用金属丝疏通，可浸泡入氨水或45%尿素溶液中，待血块去除后再用水洗净，并按蒸镭水->95%酒精-乙讎的顺序清洗，最后吹干吸管。3、盐酸浓度不可过稀。血液少盐酸作用吋间不可过短，必须在10分钟以上方nJ稀禅比色，否则血红蛋白不能充分转变成高铁血红蛋白。最好在30分钟内比色完毕。4、滴加蒸馆水时，宜少量多次，逐滴加入示混匀比色，以免稀禅过度，得不到准确结果。5、比色应在口然光线下进行，避免在阴暗处或有色灯光下比色，并将比色管刻度转向两侧，以免影响比色效果。［思考题］1、实验所得结果，与血红蛋白正常值相对照，冇何变异？为什么？

7、2、血红蛋白含量相対稳定有何生理意义？3、试讨论血红蛋口含量与水牛动物牛理机能的关系。血红蛋白计是用于测定人体血液中所含血红蛋白的百分数或每百毫升中的含虽克数。-般以100%=14.5go使用前进行清洗消毒和烘干燥方可使用。1.在血红蛋白计比色（稀释）方管内加入1/10当量盐酸到20%处。2.末梢采血，用血红蛋白计吸管吸血至20微升刻度线用脱脂棉球揩去管尖端处外部所粘附的血液。3.将吸取血液的血管迅速侵入血红蛋白比色方管的盐酸内，慢慢吹血于液体底层，并利用上层的盐酸溶液将吸管内附着的血液洗涤儿次，然后摇匀，使血液与盐酸溶

8、液混合而呈现均匀黄褐色，将比色（稀释）方管插入比色架，把无刻度的两侧面放于空隙的前后方,以免妨碍比色。4.10分钟后滴加蒸啊水进行稀释，同时进行不断地搅动混合，边滴边观察色泽是否与标准的黄褐色泽相同，至比色（稀释）方管的色泽打标准黄褐色相接近吋，应注意逐滴慢慢加入，以免稀释过度，到颜色完全相同时，即停止滴加蒸镭水。此