鸭源沙门氏菌与鸭源大肠杆菌融合菌株的构建及鉴定分析

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1、？．？－乂’占Ａ－－？■．＊－１ｖ■—８３２’．。二学号１分类号：５８５．：５８５５．１：：Ｓ２０２３５４３一＞＇心－．．八■、嗦，＼＼‘．＇’．．’１．’．．、邊：四川农业大学硕ｄｒ学位论文ｋ＾鸭源沙口氏菌与鸭源大肠巧菌融合菌株的构建及鉴定分析义？，—．古＇＇＇＂，：拿，’豕陈俊一＇‘－＇．一－■－＇鱗＇一Ｖ／Ｘｒ．．．．；，Ｉ￣指导教师蒋文灿教授学科专业预防兽医学＊■？■？—，＞？Ｖ■、，一甚咕：．＾；

2、研巧方向动物微生物与免疫学－；一—＇．＊．．、、知式；．＂■？．奔？六？？、一、：、Ｃ２０１５年６月声＊Ｖ．■＇．．Ｖｆ如．－Ｖ；ＣｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎＮｕｍｂｅｒ；Ｓ８５８．３２：Ｓ８５５．１ＳｔｕｄｅｎｔＮｕｍｂｅｒ；Ｓ２０１２３５４３ＳｉｃｈｕａｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｇｙ＾Ｍａｓｔ：ｅｒＤｅｇｒｅｅＤｉｓｓｅｉｔａｔｉｏｍＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｒｏｔｏｌａｓｔｆｕｓｉｏｎｐｐｏ

3、ｆＳａｌｍｏｎｅｌｌａａｎｄＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａＣＯ巧化ｏｍＡｕｃｋｓＢ：ｈｅｎｎｙＣ化ＤＷｅｎ－ｉｒｅｃｆ：ｅｄｂ：Ｐｒｏｆ．ＪｉａｎｃａｎｙｇＭａｏｎＰｒｅｖｅｎｔｉｖｅＶｅｔｅｒｉｎａｒＭｅｄｉｃｉｎｅｊｙＪＴｉｍｅ２０１５论文独削性寅明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研巧工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料一。与我同工作的同志对本研巧所做的任何贡献

4、均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名；後＞始／月曰棘关于论文使用授巧的声明；本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权保留，并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅可Ｗ采用影印。、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文同意四川农业大学可＾＾用不同方式在不同媒体上发表。、传播学位论文的全部或部分内容。□本论文保密，在年解密后适用本授权。□本论文不保密＿＿（请在Ｗ上□内划、像研究生签名：巧诚年月／心日导师签名的如年／月ｆ户曰摘要鸭沙口氏菌病（又名鸭副伤寒）和鸭大肠巧菌病是

5、鸭场普遍存在的两种细菌病，给养鸭业造成了极大的经济损失。生产中往往通过分别注射两种细菌疫苗进行免疫预防，费时，成本也高，因而构建鸭源沙口氏菌与鸭源大肠杆菌融合菌株可为预防鸭沙口氏菌病、鸭大肠杆菌病提供制备二联疫苗所需的优良茜株，对预防运两种细菌病具有重要意义。本实验首先对实验室保存的、分离自四川、重庆地区不同鸭场的１５樣鸭源沙口巧菌和一１０株鸭源大肠杆茜进行血清型鉴定及１７种抗生素药敏试验：筛选出株血清型为６７：ｌｖ：ｅｎｘ，并对庆大霉素（Ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ，Ｇ畑）耐药、四环素（Ｔｅｔｒａｃｃｌｉｎｅ，，，，＞ｙＫＳＴ一ｃ）敏感的鸭源沙口氏茜Ｓ７（６７

6、：：ｅｉｃ，Ｇｅｎ，Ｔｃ），及株血清型为〇７８，ｙ，Ｕｖ，ｙｙＳ并对庆大霉素敏感、四环素耐药的鸭源大肠杆菌（〇７８，Ｇｅｎ，Ｔｃ／）作为亲本菌，株；通过绘制Ｓ７、两亲本菌株生长曲线确定Ｓ７、〇２原生质体制备的最佳时间分￣？别为１４１６ｈ、１０１２ｈ；同时通过对Ｓ７、〇两亲本菌株的最低抑菌浓度（ＭＩＣ）测定，２确定高渗再生选择性培养基中应加入的庆大霉素浓度为１６ｕｇ／ｍＬ，四环素浓度为３２ｕｇ／ｍＬ。抗生素浓度应用试验结果表明Ｓ７在含１６ｕｇ／ｍＬ庆大霉素的普通琼脂培养基上生长良好，而在含３２ｕｇ／ｍＬ四环素的普通琼脂培养基上完全不生长；〇２在含３２Ｕｇ／

7、ｍＬ四环素的普通琼脂培养基上生长良好，而在含１６Ｕｇ／ｍＬ庆大霉素的普通琼脂培养基上完全不生长；并且Ｓ７、〇２在同时含１６Ｕｇ／ｍＬ庆大霉素和３２Ｕｇ／ｍＬ四环素的普通琼脂培养基上均完全不生长。采用溶菌酶（Ｌｙｓｏｚｙｍｅ，又称胞壁质酶）法制备Ｓ７、〇２原生质体，在原生质体制备过程中添加ＥＤＴＡ至终浓度为０．０１ｍｏｌ／Ｌ。通过溶菌酶浓度试验，最终选择３．０Ｕｇ／ｍＬ的溶茵酶浓度作