自噬在酿酒酵母发酵及拮抗果蔬采后病菌中的作用

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1、－－ｔ一．－￣￣—＊—－人；—学校代码１０４６３ｒ．／；—一一－—ｗ；一子：；辟■密级□乃，．＇．．１ＶＩ＇－二＇－二刀出、－？．一ＪＡ－－－－Ｌ－：．＇硕：ｔ学位论文＇．—．一自瞻在酿酒酵母发酵及掉抗果蔬采后病茜中的作用作者姓名刘酒滔指导教师谭晓荣副教授学号２０１２９３８６学科专业植物病理学培养院系生物工程学院完成时间二〇—五年五月关于学位论文的独创性汚

2、明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在指导教师指导下独立进行研究工作所取得的［成果，论文中有关资料和数据是实事求是的。尽我所知，除文中已经加＾标注和致谢外，本论文不包含其他人己经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得河南工业大学或其它教育机构的学位或学历证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对研究所做的任何贡献巧已在论文中做出了明确的说巧。若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。学位论义化者巧名＝今、１覆滿＿日期：３诚年６月扣日学位论文使用授权书本人完全

3、同意河南工业大学有权使用本学位论文（包括但不限于其印刷版和电，子版），使用方式包括但不限于：保留学位论文按规定向国家有关部口机构）送交（学位论文，｜＾式学术交流为目的赠送和交换学位论文，允许学位论文被查阅、借阅和复印，将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进斤检索，采用影印、缩印或其他复制手段保巧学位论文。保密学位论文在解密后的使用授权同上。－学位论文作者签名：？ｊ展卓円期：如咬年＾月山日指导教师盜名：日期：玄年占月Ｉ。円TheRoleofAutophag

4、yInfermentationefficientandPathogen-antagonistofSaccharomycescerevisiaeADissertationSubmittedfortheDegreeofMasterCandidate：LiuHuanhuanSupervisor：AssociateProf.TanXiaorongCollegeofBiologicalEngineeringHenanUniversityofTechnology,Zhengzhou,China摘要为了研究自噬

5、在酿酒酵母拮抗果蔬采后病原菌和乙醇胁迫中的作用，本文采用匍枝根霉、苹果炭疽菌、灰葡萄孢菌、茄链格孢菌进行检测，从中筛选出能够被拮抗的病原菌，并使用自噬基因突变株进行拮抗实验，判断自噬在拮抗过程中的作用。使用活性氧清除剂（GSH、NAC）、抗氧化酶抑制剂（2-ME、3-AT）、呼吸链抑制剂（AntimycinA、Rotenone）、自噬诱导剂（Rapamycin）、自噬抑制剂（3-Methyladenine,3-MA）处理酿酒酵母，检测酿酒酵母及其自噬基因突变株的葡萄糖消耗能力、产乙醇能力、胞内RO

6、S的含量状况、自噬基因的表达情况，判断ROS及自噬在酿酒酵母发酵效能方面的作用。结果表明，酿酒酵母可有效拮抗灰葡萄孢菌，茄链格孢菌，苹果炭疽病菌，且呈浓度依赖性，浓度越高，拮抗性越强，但不能拮抗匍枝根霉。巨自噬基因突变株atg1Δ和atg8Δ可导致酿酒酵母对灰葡萄孢菌，茄链格孢菌，苹果炭疽病菌的拮抗性下降，线粒体基因突变株atg11Δ和atg32Δ可导致酿酒酵母对灰葡萄孢菌，茄链格孢菌，苹果炭疽病菌的拮抗性显著增加。乙醇胁迫导致酿酒酵母产生ROS，诱导巨自噬及线粒体自噬。巨自噬及线粒体自噬均为酿酒

7、酵母发酵所必需，其相关基因缺失导致酿酒酵母发酵效率降低。乙醇胁迫通过ROS诱导巨自噬及线粒体自噬发生，或ROS介导了乙醇胁迫导致的巨自噬及线粒体自噬。乙醇胁迫条件下产生的O∙‐∙‐2、H2O2及线粒体中O2、细胞质中H2O2的增加导致酿酒酵母发酵效率下降，死亡率增加，诱导巨自噬及线粒体自噬。Rapamycin可以增加乙醇胁迫下巨自噬和线粒体自噬的发生；乙醇胁迫条件下酿酒酵母发生二型线粒体自噬（不依赖于PI3K），3-MA不能抑制线粒体自噬。本文结果具有以下应用价值：(1)可通过诱导巨自噬及抑制线粒

8、体自噬增强酿酒酵母对采后病菌拮抗性，从而应用于生产实践中；(2)可通过抑制巨自噬及抑制线粒体自噬，增强酿酒酵母对乙醇胁迫的抗性，提高其发酵效率及存活率，从而应用于酒类生产实践中。关键词：生物防治；拮抗酵母；乙醇胁迫；自噬IAbstractAutophagyisaphysiologicalactivityoforganismsinadversitystress,SaccharomycesCerevisiaeisoneoftheantagonismyeast,theresearchof