紫黄散抗病毒作用及对鸡免疫功能影响的研究

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1、斑紅斜牧4硕:tr学m沦文“紫黄散”抗病毒作用及对鸡免疫功能影响的研究TheResearchofAntiviralandImmuneFunctionalInfluenceof‘ZiHuangSan’forChicken一级学科：生物学二级学科：微生物学研宄生：王晓珊指导教师：沈萍教授史秋梅教授河北科技师范学院2015年6月分类号：〜hi?/密级：UDC：单位代码：10798“紫黄散”抗病毒作用及对鸡免疫功能影响的研究TheResearchofAntiviralandImmuneFunctionalInfluenceo

2、f^ZiHuangSan^forChicken二级学科：微生物学研宄方向：动物病原微生物方向研究生：王晓珊指导教师：沈萍教授史秋梅教授所在院所：动物科技学院2015年6月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的砑究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人己经发表或撰写删研賊：i：，也不句.令储彳帛河北科技师范学或其他教育机构的学位或证书酿雛耐料。与我巧工作關志对本研额做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表不了谢意。签字日期：年/月/在曰学位论文作者签名^学位论文

3、版权使用授权书本学位论文作者完全了解河北科技师范学盧■有关保留、使用学位论文的规定。赔桴敉河北科技师范学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。(保密的学位论文在解密后适用本授权说明）导师签名:学位论文作者签名:签字日期：年<月日签字日期：x年/月/y日缩略词英文缩写英文全称中文名称NDVNewcastlediseasevirus新城疫病毒AMPVAvianparamyxovirus禽副粘病毒

4、EPSEchinaceapolysaccharide紫锥菊多糖APSAstragaluspolysaccharide黄芪多糖CEFChickenembryofibroblast鸡胚成纤维DMEMDulbecco‟smodifiedeaglemedia杜氏伊格尔培养基IBDVInfectiousbursaldiseasevirus传染性法氏囊病毒IgMImmunonoglobulinMIgM抗体IgGImmunonoglobulinGIgG抗体IgAImmunonoglobulinAIgA抗体hhour时minminu

5、te分rpmrevolutionsperminute转/分mgmilligram毫克µgmicrogram微克µLmicroliter微升mLmilliter毫升I摘要为了研究中药复方“紫黄散”抗病毒能力以及对鸡免疫功能的影响，本课题通过检测“紫黄散”对新城疫病毒（NDV）感染鸡胚成纤维细胞（CEF）能力的影响以及其对免疫疫苗后鸡机体内抗体效价的影响，观察“紫黄散”的抗病毒能力；通过免疫器官指数的变化、免疫球蛋白含量的测定、免疫器官及粘膜免疫组织淋巴细胞数量的变化，讨论“紫黄散”对鸡机体免疫功能的影响。本研究中，我们

6、以5000μg/mL为中药复方“紫黄散”起始作用浓度，利用2%细胞维持液（DMEM）将其倍比稀释至9.8μg/mL，共计10个浓度，分别加入到9日龄鸡胚中，对照组只加2%DMEM。72h后，利用MTT法测细胞活性以确定细胞安全浓度。随后，利用“先药后毒”、“先毒后药”、“毒药同时”三种不同的方式，将“紫黄散”和NDV加入到已形成致密单层的CEF中，MTT法观察不同的加药方式对NDV感染CEF能力的影响，并检测最适的加药浓度。另外，我们选取健康1日龄海褐兰雏鸡120只，饲喂至8日龄时随机分为四组。其中按照A高剂量组（0

7、.2g/只）、B中剂量组（0.1g/只）、C低剂量组（0.05g/只）将“紫黄散”添加入日粮中，D组设为对照组。每10天从各组随机选取5只鸡剖杀，进行NDV和传染性法氏囊病毒（IBDV）抗体效价、免疫器官指数、免疫球蛋白含量的检测，利用H.E.染色及免疫组化法观察免疫器官以及粘膜免疫组织淋巴细胞数量的变化。试验结果表明：1.“紫黄散”的最大药物安全浓度为625μg/mL。感染NDV的CEF中加入“紫黄散”对细胞均具有不同程度的保护作用，其中先加入“紫黄散”后加入NDV时，细胞保护率最高，以625μg/mL尤为显著。2

8、.三种剂量的“紫黄散”对免疫NDV和IBDV疫苗后鸡机体内抗体效价均有显著的提高作用。3.三种剂量的“紫黄散”均对免疫器官指数以及鸡机体内免疫球蛋白含量有一定促进作用，中剂量组效果最好。4.三种剂量的“紫黄散”均能促进鸡机体主要免疫器官以及粘膜免疫组织内淋巴细胞增殖。其中高剂量组在短时间内即可显著促进淋巴细胞的增殖，中剂II量组则于后期发挥明显