转基因紫花苜蓿生理特性及其对碱胁迫的响应

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1、分类号：单位代码：１０１４０密级：公开４０３１５３１８学号：４０，？（￡￥八聲ＬＩＡＯＮＩＮＧＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ硕士学位论文ＴＨＥＳＩＳＦＯＲＭＡＳＴＥＲＤＥＧＲＥＥ转基因紫花苜蓿生理特性蓿生理特性及其对碱胁迫的响应ＰｈｓｉｏｌｏｉｃａｌＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＴｒａｎｓｅｎｉｃＡｌｆａｙｇｇｌｆａａｎｄＩｔｓＲｅｓｏｎｓｅｔｏＡｌｋａｌｉＳｔｒｅｓｓ英文题目：ｐ论文作者：孟靖指导教师：韩阳教授专业：植物学完成时间二○一八年五月：擎

2、申请辽宁大学硕士学位论文转基因紫花苜蓿生理特性及对碱胁迫的响应PhysiologicalCharacteristicsofTransgenicAlfalfaandItsResponsetoAlkaliStress作者：孟靖指导教师：韩阳教授专业：植物学答辩时间：2018年5月21日二○一八年五月·中国辽宁辽宁大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立完成的。论文中取得的研究成果除加以标注的内容外，不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，不包含本人为获得其他学位而使用过的成果。对本文的研究做出

3、重要贡献的个人和集体均已在文中进行了标注，并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的原件、复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权辽宁大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。同时授权中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国博士学位论文全文数据库》和《中国优秀硕士学位论文全文数据库》

4、并通过网络向社会公众提供信息服务。学校须按照授权对学位论文进行管理，不得超越授权对学位论文进行任意处理。保密（），在年后解密适用本授权书。（保密：请在括号内划“√”）摘要摘要紫花苜蓿（MedicagostativaL.），豆科苜蓿属，多年生草本植物，是目前为止种植最广泛的牧草作物之一。但是紫花苜蓿中的木质素成分会降低其在牲畜体内的消化率，影响紫花苜蓿的经济价值。4-香豆酸辅酶A连接酶（4CL）是紫花苜蓿中木质素合成途径的关键酶，通过下调4CL酶含量可有效降低紫花苜蓿中木质素含量。目前利用反义RNA技术，将紫穗槐中的4CL基因反义转入

5、紫花苜蓿中，成功获得转反义4CL基因紫花苜蓿。但在优良转基因紫花苜蓿品种扩大培养时却面临一个严峻的问题——土地盐碱化。中国土壤盐碱化问题日趋严重，已成为限制我国农牧业发展的一个重要因素。而转基因低木质素紫花苜蓿应对土壤碱胁迫的生理机制，目前未见报道。本实验材料采用已获得的转反义4CL基因低木质素紫花苜蓿，研究其生理特性，同时研究土壤碱胁迫对T1代转基因紫花苜蓿生理生化及基因表达方面的影响。研究取得如下进展：（1）通过目的基因PCR检测，确定T1代紫花苜蓿为阳性转基因紫花苜蓿，表明反义4CL基因已成功遗传给下一代，并且能够正常表达。酶

6、活性及木质素含量测定的结果表明，反义4CL基因的导入能有效降低4CL酶的合成，T0代转基因紫花苜蓿木质素含量较野生型紫花苜蓿下降了54.44%。对T0代和T1代转基因紫花苜蓿净光合速率测定结果显示，同等光照强度下，转基因型紫花苜蓿的净光合速率均高于野生型。实验结果说明，反义4CL基因的导入在有效降低紫花苜蓿木质素含量的同时并不影响紫花苜蓿的正常生长，且同等光照强度下，转反义4CL基因紫花苜蓿的净光合速率要高于野生型紫花苜蓿。（2）抗碱性生理研究了野生型和T1代转基因紫花苜蓿过氧化氢（H2O2）、超氧自由基（O-2∙）等活性氧，过氧化

7、氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）等抗氧化酶活性，丙二醛（MDA）、脯氨酸、叶绿素含量及叶片的相对电导率。研究结果显示，较野生型紫花苜蓿而言，转基因型紫花苜蓿H-2O2、O2∙等活性氧含量较低，MDA含量及叶片相对电导率并无明显的趋势变化，CAT、POD抗氧化酶活性随碱处理浓度的增加无显著性差异。这说明转基因型紫花苜蓿对外界环境的改变敏感程度低，受碱胁迫伤害小，耐碱性I摘要高。（3）测定碱胁迫下野生型和T1代转基因紫花苜蓿抗氧化物酶系的基因表达情况,结果显示，野生型紫花苜蓿三类SOD基因及CAT基因表达情

8、况随碱处理浓度的增加，变化趋势明显，表现出很强的应激性。POD基因表达量在各个处理浓度组之间无显著性差异。而转基因紫花苜蓿Mn-SOD、Fe-SOD及CAT基因表达趋势平缓，各个处理浓度组之间无显著性差异。Cu/Zn-SOD及POD基