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时间:2019-03-12
《bmcpv、bmnpv入侵的分子机制初步研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、M例^爭SOOCHOWUNIVERSITY>1/DII匕论文题目BraCPV�BmNPV入侵的分子机制初步研究研究生姓名=王四妹指导教师姓名薛仁宇专业名称生物化学与分子生物学研究方向基因表达与调控论文提交日期2015年4月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明:所提交的学位论文是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不含其他个人或集体己经发表或捵写过的研究成果,也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中
2、以明确方式标明。本人声明的法律责任。论文作者签名:1时日期:4.w.苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定,即:学位论文著作权归厲苏州大学>本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致,苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文,可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库
3、进行检索。涉密论文口本学位论文厲在年—月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名fX0吐日期:10^4.1}中文摘要作为我国养蚕生产上危害较大的蚕病为家蚕质型多角体病毒(BombyxmoriCytoplasmicpolyhedrosisvirus,BmCPV)病和家蚕核型多角体病毒(Bombyxmorinuclearpolyhedrosisvirus,BmNPV)病。本研究基于本实验室已有的实验基础及研究结果,对BmCPV和BmNPV入侵家蚕细胞的分子机制进行了进一步的研究。通过生物信息学分析软件对BmCPV9
4、候选蛋白进行功能分析,9种蛋白是:钙网蛋白(Calreticulin,CRT),网格蛋白(Clathrin,CLAT),整合素β(Integrinbeta,ITGB),BMKETTIN(BMKT),核输入蛋白(Importinalpha,IPOA),衔接蛋白(Adaptorprotein,AP),激活蛋白激酶受体(ReceptorforactivatedproteinkinaseC,RACK),受体型鸟苷酸环化酶(Receptortypeguanylylcyclase,Gcy),阿片结合蛋白(opioid-bin
5、dingprotein,OPB),深入了解候选受体的生物学功能及分布特点,通过蛋白在生物中所起的作用,研究病毒在家蚕感染中可能采用的入侵方式;对BmCPV候选受体基因(Receptortypeguanylylcyclase,opioid-bindingprotein,BMKETTIN,Calreticulin,Importinalpha)进行原核表达,将表达的蛋白免疫小鼠制备抗候选受体的多克隆抗体;用制备的多克隆抗体进行抗体封闭实验探讨抑制候选受体功能表达后对BmCPV增殖的影响。生物信息学分析结果显示,CRT具
6、有三个功能结构域,即信号肽、钙网蛋白及卷曲螺旋区,钙网蛋白家族主要与ER结合发挥作用;CLAT主要由网格蛋白区和网格蛋白重链同源重复区组成,网格蛋白是一种细胞质蛋白,聚集在细胞内膜多面体晶格中形成一个蛋白包被的膜通道;ITGB主要有整合素β亚基、RPT区、跨膜区和整合素-b-cyt结构域,它介导的是细胞与胞外基质、细胞与细胞间的相互作用;BMKETTIN主要有IGc-2和IG结构域;IPOA主要有8个ARM重复结构域,它可介导β-连环蛋白与它的配体的相互作用;AP主要有衔接蛋白-N结构域和α-衔接蛋白-C2结构域
7、,它可能与膜蛋白的胞质尾相互作用;RACK由7个WD40结构域组成,与蛋白结合相关;Gcy主要由ANF结合域、跨膜结构域、酪氨酸激酶结构域和腺苷酰/鸟苷酸环化酶,催化结构域组成,主要功能是细胞内信号转导;OPB具有信号肽、RPT区、类IG区、IG区和跨膜结构域,OPB与细胞识别相关。用制备的多克隆抗体对家蚕细胞进行相应的抗体封闭结果显示,抗体封闭住受体蛋白后,BmCPV的感染效率明显下降。与对照组相比,高浓度的IPOA、CRT、GCY、OPB的对BmCPVS1基因的抑制效率最明显,抑制率分别为78.6%、59%、
8、54%和98%。基于对BmCPV的一系列研究,家蚕核型多角体病毒(Bombyxmorinuclearpolyhedrosisvirus,BmNPV)入侵家蚕细胞时,BmNPV与细胞的相互作用蛋白之间的关系也引起我们的关注。通过查阅文献资料,我们猜想BmNPV与细胞的相互作用蛋白可能与脂筏有密切联系。用抗BmNPV病毒抗体,采用VOPBA的病毒受体候选方法并结合质谱鉴定及生
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