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1、生态学杂志ChineseJournalofEcology2003,22(5):131～1363非培养方法在土壤微生物生态学研究中的应用1,3332,33张汉波段昌群屈良鹄(123云南大学生物学系,昆明650091;云南大学环境科学系,昆明650091;中山大学基因工程教育部重点实验室,广州510275)摘要由于有相当数量的土壤微生物是目前不可培养的,因此利用传统培养技术来研究土壤微生物,不仅费时费力,所得到的结果可能和真实的情况相差甚远。近年来发展了三类不需培养的方法来研究土壤微生物的种类和数量,这些方法大体上分为生物化学、生理学和分子生物学三类。生物化学方法
2、主要根据细胞膜磷脂酸(PLFA)的种类和数量来判定微生物的多样性;BIOLOG微量板分析系统是生理学方法的代表,它主要是根据土样细胞悬液对95种单一碳源的利用模式来说明群落结构的变化;分子生物学方法是发展应用最广的方法,基本步骤是提取土壤的总DNA,然后用通用引物或选择性高的引物来扩增16SrRNA基因。由于对扩增产物分析方法的不同,该方法又可分为PCR2DGGE,PCR2RFLP等。最近在PCR2RFLP基础上发展起来的T2RFLP分析方法,将微生物的多样性分析工作同RDP(ribosomaldatabaseproject)数据库结合,充分利用了Intern
3、et的数据资源共享的优势,具有分辨率高,可实现自动化等优点,是未来土壤微生物生态学研究的有力工具。关键词微生物多样性,磷脂酸,BIOLOG微量板分析,末端限制性酶切片段长度多态性中图分类号X172文献标识码A文章编号1000-4890(2003)05-0131-061,3Cultureindependentmethodsforstudiesonmicrobialecologyofsoils.ZHANGHanbo,DUAN2,33(1Changqun,QULianghuDepartmentofBiology,YunnanUniversity,Kunming650
4、091,2China;DepartmentofEnvironmentalScience,YunnanUniversity,Kunming650091,China;3GeneEngineeringKeyLaboratory,MinistryofEducation,ZhongshanUniversity,Guangzhou510275,China).ChineseJournalofEcology,2003,22(5):131～136.Sincemostspeciesofmicroorganismsinsoilsarenotcultivableinthelabora
5、tory,theinvestigationoftheircommunitiesisatime2consumingandhardworkbytraditionalcultureprocedure.Moreover,somewrongconclusionsmaybedrawn.Inthepastdecades,threekindsofculture2independentmethodshavebeendevelopedsothatgreatprogresshasbeenmadeinthisfield.Thebiochemicalmethodistodetermin
6、atethemicrobialcommunitiesbyanalysisofphospholipidfattyacids(PLFA)ofcellmembrane.Themetabolism2basedapproach,throughobservationsoftheutilizationpatternsof95single2carbonsourcesperformedontheBIOLOGmicroplates,canprovidealotofinformationaboutthemicrobialfunctionalgroupsinthesoils.Thet
7、hirdmethod,moleculartechniques,ismostprevalentlyusedtoexplorethemicrobialcommunities.Briefly,themolecularapproachwasstartedwiththeextractionandpurificationoftotalDNAfromsamplesoils,followedbyPCR2amplificationof16SrRNAgenewithuniversalorspecialprimers.AstheanalysisprocedureofPCRprodu
8、ctsisdif2ferent,ava
