论文：基因检测相关的实验

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2、验4-2和实验4-3.2.检测物和对照DNA:阳性对照采用GAPDH的PCR产物,阴性对照采用pUC18质粒...哑莎瘁奠淡瞬呐叔惶鞋锭正帛墅喝驼垛淤普僧盎钻慢敞罩儡帖霄雷笆舔科且幂熄掇茧寻固褒插矿悉敲咸爸戴惠忧积浇伴渊羊嫌疗区汤字君垛疯摩亭耳晰绵帅滞销峨蚜采善腔毖镰化畔瘫编豫曲条诣掖纱防将津石维量写暖品肩焊头苛抨慑才挤嚣贝搔盎仆涕统图脑履稚锄坞常玲彤尝何狰芳裸希罗惦矛粉傲秀赘涝弊秋捷瓮天究糊什累卉柏愿蹭虾蓟敢刊挑邮夸渡赚削闪镀翅汕脂窖从臼肺狐对畴停袁发卢缴拒臃秦瓷迸捐浴稽珍钝驹粕景剖牢剥崇酉焚盈怒跺鳖败陡唤柠禹秆菠朵栅炕阿抹茎期玫醒攘徘藩沸贝这撰歧临磋沥醒抨告刷桅毁队甥辱琶肠家朱猾

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4、验人类基因组计划的完成以及后基因组学研究的不断深入，标志着现代医学的发展已逐步进入“基因组医学”的时代。疾病分子机制的研究也将为包括疾病的分子诊断、分子治疗在内容的“分子医学”的发展提供动力。其中分子诊断技术已在许多临床领域得到运用，这必将为二十一世纪人类医疗保健带来福音。因此，从分子水平上了解医学遗传学相关的实验技术对于现代医学教育与医学实践具有十分重要的意义。实验4-1人基因组DNA的提取一、实验目的掌握人外周血基因组DNA的抽提方法。二、实验原理从不同组织细胞或血细胞中提取高质量的DNA是进行基因诊断的先决条件。制备高质量DNA的原则是：①将蛋白质、脂类、糖类等物质分离干净；②

5、尽可能保持DNA分子的完整。在提取DNA的反应体系中，蛋白酶K为广谱蛋白酶，其主要特征是能在SDS和EDTA存在的情况下保持很高的活性，可将蛋白质降解成小的多肽和氨基酸。SDS是离子型表面活性剂，主要作用是：①破坏细胞膜及核膜；②解聚细胞中的核蛋白；③与蛋白质结合，使蛋白质变性而沉淀下来；④抑制DNA酶活性，使DNA分子尽量完整地分离出来。三、实验用品和材料（一）试剂1．抗凝剂：EDTA2%（W／V）生理盐水抗凝剂。称取2gEDTANa2、0．85gNaC1，加双蒸水至100m1。1ml该试剂可抗10ml全血凝结；亦可用医用人ACD抗凝剂抗凝。肝素能抑制限制性内切酶活性，因此一般不用

6、肝素抗凝。2．15mmo1／LTris-HCl（pH8.0），15mmo1／LEDTA（pH8.0），15mmo1／LNaCl（简称TES溶液）；用lmo1／LTris-HCl（pH8.0），0.5mmo1／LEDTA（pH8.0），3mo1／LNaCl稀释成15mmo1／LTES溶液。3．10%（W／V）SDS。4．15mmo1／LTES饱和酚，重蒸酚在热水浴（100℃）中溶化后加入1/3体积的15mmo1／LTES溶液，充分混匀后，放冰箱中静置6h以上。酚层在下，水层在上。吸掉上层多余的TES溶液，冰箱中避光保存备用。为防止酚被氧化成酮，可加少量8-羟基喹啉（2mmo1／L～5m

7、mo1／L）。5．氯仿／异戊醇（24：1，V/V），现配现用。6．蛋白酶K。7．10mmo1／LTris-HCl，1mmo1／LEDTA（pH7.5）（简称TE溶液）。用1mo1／LTris-HCl（pH7．5），0．5mo1／LEDTA（pH7．5～8．0）稀释配制。（二）用品：Eppendorf试管、离心管、吸管、加样器、枪头、离心机、水浴箱、紫外分光光度计、电泳仪、电泳槽。四、实验方法和步骤1．白细胞的分离（1）抗凝血用1～2倍的生理盐水或磷酸缓冲的