人参皂苷rg1对三维培养关节软骨细胞的作用

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1、河南中医学院2012届硕士研究生学位论文人参皂苷Rg1对三维培养关节软骨细胞的作用研究生姓名：赵蕾导师：曹向阳主任医师指导组成员：李沛主任医师郭艳幸主任医师饶耀剑主任医师学科专业：中医骨伤科学所属院系：第二临床医学院中国﹒郑州２０１２年４月30日硕士学位论文原创性声明本人所呈交的硕士学位论文，是在导师曹向阳教授的指导下，独立进行科学研究工作所取得的成果。除文中已特别加以注明引用的内容外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。特此声明。论文作者（签名）：年月

2、日硕士学位论文使用授权声明本人已完全了解河南中医学院有关保留、使用硕士学位论文的相关规定，同意学校保留或向国家有关部门、机构送交本学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权河南中医学院可以将本论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编本论文（注：保密论文在解密后适用本授权声明）。特此声明。论文作者（签名）：导师（签名）：年月日年月日目录中文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„2英文缩略词表„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„4前言

3、„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„5实验„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„71材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„72结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„13讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„151软骨细胞的体外三维培养„„„„„„„„„„„„„„„„„„„152人参皂苷对软骨损伤相关疾病治疗研究„„„„„„„„„„„„„„192.1人参皂苷Rgl的药理作用„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„192.2人参皂苷Rgl对软骨损伤相关疾病治疗研究„„„„„„„„

4、„„„„20结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„23致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„24参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„25附录1：照片„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„29附录2：综述„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„31附录3：论著、科研„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„39中文摘要中文摘要目的：临床中，由外伤或疾病引起的关节软骨损伤很常见，成人关节软骨无血供，无淋巴液，也没有神经支配，损伤后的关节软骨的修复能力非常弱，软骨细胞几乎不能自己修复损伤，

5、随着病情的发展这些损害将导致骨关节炎病，使患者生活质量明显下降。应用组织工程技术治疗关节软骨缺损是目前被看好的方法之一，另一方面，临床上中医药在骨关节病治疗过程中也积累了丰富的经验。在此基础上有必要从中西医结合方面讨论中医药对体外培养软骨细胞方面的作用。本实验将SD大鼠关节软骨细胞接种于外消旋聚乳酸（PDLLA）支架中并在体外培养，在人参皂苷Rg1的单独作用下，通过细胞形态学、细胞计数、Ⅱ型胶原免疫组化等检测手段，了解人参皂苷Rg1对三维培养中软骨细胞表型的稳定及增殖促进作用。方法：①SD大鼠关节软骨分离、培养。②倒置显微镜下观察软骨细胞生长状况，并对培养的第三代软骨细胞进行细胞计数。

6、③收集第三代软骨细胞种植于外消旋聚乳酸（PDLLA）支架中每日倒置显微镜下观察细胞形态、生长情况。④倒置显微镜，电镜下观察人参皂苷Rg1作用下软骨细胞形态学改变。⑤免疫组织化学法观察人参皂苷Rg1对支架内软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响。⑥应用SPSS17.0统计软件分析处理，数据以均数±标准差表示，采用t检验和方差分析进行组间比较。结果：①单层培养贴壁后第5代、6代大多数细胞成纤维样变，三维培养组连续培养6周HE染色显示软骨细胞形态始终保持圆形，软骨细胞胞质内紫红色异染，细胞核大且圆，有些区域出现细胞重叠生长。②单层培养6周细胞Ⅱ型胶原免疫组化检测细胞无棕黄色着色，呈阴性。③单层培养软骨细

7、胞短期内的增殖速率明显高于三维培养组(P