无角间性奶山羊pisrt1和foxl2基因及pis区域研究

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1、万方数据分类号：墨墨13：3密级：公珏单位代码：!QQ墨鱼学号：2Q!13墨2无角间性奶山羊PlSRT1和FOXL2基因及PIS区域研究StudyonPISregion，PISRTlandFOXL2genesinpolledintersexdairygoat学位申请人：张宇指导教师：王志刚副研究员李祥龙教授学科专业：动物遗传育种与繁殖学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二O一四年五月二十五日万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也

2、不包含为获得塑皇垦盎些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：弓长哼签字日期：zo1年年r月弓锣日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑皇垦盔些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑兰垦盔些盘鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：弓渗寄导师签名：签字日期：加l毕年5月弓。日

3、签字日期：工O1年年f月弓0日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：万方数据摘要111111IIIII11111IIIHIIIIIIIIIIIlY2668353无角间性综合症(PolledIntersexSyndrome，PIS)是由于一段位于lq23的11．7kbDNA序列的缺失导致山羊无角与间性紧密连锁的一种疾病。研究发现，11．7kb的DNA片段为非编码序列，但表现出转录调控的作用，被调控的基因至少存在2个：PIS区调控的第一个转录产物PISRTl(PISregulatedtranscriptnumber1)和叉头蛋白FOXL2(forkheadboxL2)。山羊

4、PISRTl基因不编码蛋白质，在转录水平发挥其功能，目前已初步认定为睾丸抑制因子。FOXL2基因编码一个典型的叉头蛋白转录因子，具有决定卵巢发育的作用。PIS区域的缺失并不是引起山羊间性的唯一原因，为探究山羊间性的作用机制，本研究从唐山奶山羊的性别鉴定入手，探究了奶山羊性别遗传学基础；对PISRTl和FOXL2基因多态性进行分析并探究两基因在间性和正常奶山羊中的变异差异以及两基因的相互作用关系；使用生物信息学软件预测了山羊PISRTl、FOXL2基因的启动子区，并对FOXL2基因启动子区进行了活性分析。通过对34只问性奶山羊性别决定基因SRY的PCR扩增结果表明，所有的间性山羊均为SRY

5、基因缺失，问性奶山羊是由雌性性反转雄性化的结果。利用PCR技术对33个问性奶山羊和28个正常奶山羊的PISRTl基因的序列分析表明，唐山奶山羊PISRTl基因存在两个多态位点g．7032G>A与g．7049G>C，并且两位点为完全连锁。间性山羊CC基因型频率(0．667)与CG基因型频率(O．333)相比占明显优势，间性和正常山羊个体独立卡方检验结果显示该基因型在间性个体和正常个体之间差异极显著(P<0．01)。有角山羊GG基因型频率(0．857)高于CC基因型频率(0．143)，且有角和无角个体独立卡方检验结果显示有角和无角个体之间差异极显著(P

6、羊性别和角的表型密切相关，但不完全符合Z模型假说。使用SPSS分析PISRTl基因和FOXL2基因不同基因型的相关性，结果表明正常山羊两基因相关性不显著(相关系数为．0．093，P>0．05)；间性个体的两基因相关性极显著(相关系数为0．688，P<0．001)。由此可知，朋足丌基因和FOXL2基因不同基因型间的相互作用与山羊无角综合症紧密相关。使用不同的启动子预测软件对PISRTl基因的启动子预测结果并不唯一，在一1558位置发现一个TATA-box，一1528位置找到一个转录起始位点TSS，在一1757位置发现了与RNA聚合酶密切联系的NFI／CTF转录因子，以及能够和上游启动子元件

7、CAAT框和GC框相结合的TFIID转录因子。由此推测该基因的启动子是依据TATA盒为核心启动元件，．1700至．50区段推测为PISRTl基因的启动子候选区段。对FOXL2基因构建启动子缺失载体转染细胞的启动子活性分析结果表明，FOXL2基因．934／+324区域表现转录活性，．32／+324区段为转录的基本元件；．934／．456区域在转录过程中起负调控的作用，一456／．192区起正调控作用。关键词：奶山羊；无角间性综合症；P