兔眼蓝莓叶片再生及多倍体诱导的研究

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1、分类号学校代码!Q5垒2密级学号2Q!!Q21垒123垒兔眼蓝莓叶片再生及多倍体诱导的研究StudiesonLeafRegenerationandPolyploidInductionofRabbiteyeBlueberry指导教师姓名、职称邱数兰副数援湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一四年五月摘要本研究以兔眼蓝莓的杰兔品种为实验材料，通过组织培养建立了叶片再生体系及通过石蜡切片的方法对再生过程进行了细胞组织学观察，并采用秋水仙素处理蓝莓离体茎尖诱导多倍体，对多倍体进行了鉴定，为兔眼蓝莓的组织快繁及培育新品种奠定了基础。主要研

2、究结果如下：1．建立了高频、高效的兔眼蓝莓离体叶片再生体系。以WPM为基本培养基，添加1．4～1．7mgmZT，在离叶尖1／3的位置横切叶片成两部分来接种，先暗培养20d(25+2。C)后再光照培养(14h光照／10h黑暗，2000lux，25+2。C)的条件下，诱导再生苗的效果最佳，诱导率最高达86．8％。2．离体叶片再生主要是通过直接器官发生途径，再生的不定芽主要起源于叶脉维管束的薄壁细胞。培养3d左右时时脉中薄壁细胞中出现核大、胞质浓厚的细胞；接着这些细胞分裂形成分生组织细胞团，然后突破叶片上表皮，进而分化成不定芽、发育成

3、苗。离体叶片再生苗的形成具有丛生性特性和不同步性，分生组织细胞团最早突破叶片上表皮是在培养的第12天左右。3．取离体叶片再生芽苗的茎尖进行共培养诱导多倍体，50mg／L秋水仙素处理50d和60mg／L秋水仙素处理40d时，诱导植株变异的效果最佳，变异率均达30％以上，有利于多倍体的发生。4．通过去壁低渗火焰法制片，对未经诱导处理的植株与变异植株进行染色体观察与计数，发现未经处理的杰兔品种的染色体数为2n=6X=72，为六倍体，诱导加倍后的多倍体植株染色体数目明显增多，大于72条。诱导的多倍体植株呈现出生长缓慢、茎秆矮、粗壮、叶片

4、和茎上表皮毛明显增多、气孔变大的特性。关键词：兔眼蓝莓，叶片再生，组织学观察，多倍体诱导AbstractPremier,oneoftheRabbiteyeBlueberryvarieties，usedasmaterials，wereestablishedleafregenerationsystembytissueculture，thenobservedtheregenerationprocessbyparaffinsection，andtreateditsstemtipwithcolchicinetoobtainpolyploi

5、ds，thenidentifiedtheplantthatwastreated，whichlaidafoundationthatbenefitforRabbiteyeBlueberrytissuerapidpropagationandobtainnewvarieties．刀jemainresultswereasfollows：1．Thehighfrequency,hi曲efficiencyleafregenerationsystemofrabbiteyeblueberryinvitroculturewasestablished．

6、TheresultswereshowedthatthemosteffectivemethodwastousetheWPMasthebasicculturemedium，add1．4～1．7mgCLofZTintoit，thencross-cutleavesintotwoportionsin1／3fromthetipoftheleaves，andculturedinthedarkfor20d(25+2。C)beforeculturedinthe15hlighting(20001ux，25士2"C)and9hdarknessfore

7、achday,itsinductionratecouldreach86．8％．2．Theleafregenerationofpremieristhedirectorganogenesis．Theresultsofhistologicalobservationswereshowedthatadventitiousbudmostlyoriginatedfromthevascularbundleofvein．Whenculturedfor3days，theparenchymacellsintheveinofleavesinvitroc

8、ultureshowedthecharacteristicsoffllargenuclearanddensecytoplasm；ThosecellIIIdividedintogroupsthendifferentiatedintoadventitiousbuds