白菜耐铝基因型的筛选及耐铝相关基因克隆

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1、独创性声明本人声明，所呈交的学位论文，是在指导教师指导下，通过我的努力取得的成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已经作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果，也不包含在江西农业大学或其它教育机构获得学位或证书而使用过的材料。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意。如被查有严重侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。学位论文作者亲笔签名：蚴日期：论文使用授权的说明籼12、6、7本人完全了解江西农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权送交论文的复印

2、件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。保密，在——年后解密可适用本授权书。口不保秘，本学位论文属于不保密。团(请在方框内打“√”)学位论文作者亲笔签名：垄l垒丑§日指导教师亲笔签名：期：型分6、7日期：刃／)·多·乡本研究承蒙江西省自然科学基金项目(编号：2007GZNO199)的资助。在此表示感谢!摘要摘要白菜(BrassicacampestrisL．ssp．chinensisMakino)属于十字花科芸薹属白菜亚种，品种资源丰富，主要分布在我国南方地区，而南方

3、酸性红壤的铝毒害却严重影响了其产量和质量。本研究通过开展白菜耐铝基因的克隆，以期通过基因工程手段获得白菜耐铝性新品种。这不仅为芸薹属作物的遗传改良奠定了基础，而且对实现红壤资源的高效利用具有重要的意义。本论文以矮脚黄白菜自交系(97．3．2)、黄心乌自交系(003．27)、上海青自交系(98．4．2)、黄芽菜自交系(97．8．6)、白蔓菁芜菁自交系(001．24)五个白菜自交系为材料，筛选白菜最耐铝基因型和最不耐铝基因型，采用cDNA—AFLP、ReverseNorthernblot、RACE等优势互补的分子技术克隆白菜耐铝基

4、因，研究结果如下：(1)对五种白菜自交系种子进行不同程度的铝胁迫处理，采用根相对伸长率测定法和苏木精染色法筛选出最耐铝基因型为矮脚黄，最不耐铝基因型为黄芽菜。(2)以矮脚黄自交系和黄芽菜自交系为材料，构建不同铝胁迫时期的白菜根尖RNA混合池，通过cDNA—AFLP技术筛选出5个耐铝相关的TDFs，reverseNorthernblot验证均呈阳性。(3)4个TDFs测序成功：H．A7T12长485bp，与粳稻群组eDNA克隆同源性100％，编码的蛋白质与粳稻假拟蛋白的相似性100％；A．ASTl7长271bp，与拟南芥烟酰胺腺

5、嘌呤二核苷酸结合域蛋白mRNA同源性89％，编码的蛋白质与拟南芥黄素腺嘌呤二核苷酸／烟酰胺腺嘌呤二核苷酸结合氧化还原酶相似性85％；A．A19T12长301bp，与小盐芥mRNA全长cds克隆同源性81％，编码的蛋白质与拟南芥抗性蛋白相似性94％。A．A10T8长300bp，与拟南芥二氢硫辛酰胺S乙酰基移转酶基因同源性100％，编码蛋白与二氢硫辛酰胺S乙酰基移转酶相似性100％，初步判断其通过调控细胞物质代谢来增强白菜耐铝性。(4)RACE技术结合巢式PCR，获得了A．A10T8基因全长序列1691bp，包含6个ORF，最大O

6、RF位于299．1513之间，编码405个氨基酸。BLAST显示A．A10T8全长基因与二氢硫辛酰胺S乙酰基移转酶基因同源性100％，编码的蛋白质产物与二氢硫辛酰胺S乙酰基移转酶相似性100％。关键词：白菜；耐铝基因；eDNA．AFLP；RACEABSTRACTBrassicachinensiswhichbelongstocruciferouspakchoisubspecies，mainlydistributesinsouthernChinawithabundantcultivars．butaluminumtoxicityof

7、theacidredsoilinsouthernChinahasseriousimpactonitsyieldandquality．BycloningthealuminiumresitancegeneofBrassicachinens西andexpectingtogetnewcultivarsofBrassicachinensiswithaluminiumresitancebymeansofgeneticengineeringinthisstudy．Itnotonlysetsabasisforgeneticimprovemen

8、tofBrassicachinensis．butalsoiSofgreatsignificancetouseofredsoilresourcesemciently．ThispaperusesthefiveinbredlinesofAijiaohuang(97·3-2)，Hua