巨噬细胞在肝癌细胞上皮-间质样表型转化中的作用及其机制的研究

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1、复旦大学博士学位论文巨噬细胞在肝癌细胞上皮--间质样表型转化中的作用及其机制的研究姓名：傅修涛申请学位级别：博士专业：外科学指导教师：樊嘉2012-04三塑塑塑墅兰叁墅垄塑塑型堂壁壅型鳖垡主竺堡旦墨苎垫型竺婴窒主塞塑薹巨I筮细胞对人肝癌细胞上皮．间质样表型转化中的作用及其机制的研究中文摘要肝细胞肝癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)(简称肝癌)是全球发病率和死亡率均较高的恶性肿瘤之一，其发病率居第五位，病死率居第三位，在我国每年新诊断的肝癌约占全世界的55％，其死亡率在我国恶性肿瘤

2、中位列第二位。虽然近年来诊断和治疗技术的进步使得肝癌患者的生存率有了较大提高，但术后复发与转移已成为影响肝癌预后的主要因素。临床上需要探索和阐明肝癌复发转移的分子机制从而准确预测患者预后、寻找高效的靶点并设计合理干预治疗的新方法。传统的肝癌研究主要注重于肝癌细胞自身，探索其内在的基因和蛋白变化来解释肿瘤的复发和转移。然而，肿瘤是在一定的局部环境中生长的，所以局部的微环境对于肿瘤的发生发展也起着至关重要的作用。炎症微环境作为肿瘤微环境的重要组成部分，与肿瘤的发生发展、复发转移都有着密切的关系。例如乙肝病毒或

3、丙肝病毒感染或诸如嗜酒、肥胖等非感染因素造成的肝脏慢性炎症及继发的肝硬化状态就是肝癌发生发展的“土壤”。上皮．间质样表型转化(epithelialmesenchymaltransition．EMT)是指在特定的生理和病理情况下，上皮细胞暂时丧失极性并表现出具有移行能力的间质细胞的现象，是癌细胞脱离原发灶完成转移的重要步骤。目前认为肿瘤细胞发生EMT是微环境中作用因子和肿瘤细胞相互作用的结果，这导致细胞通路和基因表达发生改变，最终使肿瘤细胞更富于侵袭性而利于转移。肿瘤相关巨噬细胞(Tumorassociat

4、edmacrophage，TAM)存在于肿瘤间质中，是肿瘤免疫微环境中主要的成分，其通过分泌特殊的细胞因子、生长因子等作用于肿瘤相关基质或内皮细胞，参与了促肿瘤发展、刺激肿瘤细胞生长和转移，诱导肿瘤新生血管和淋巴管生成、免疫抑制等过程。在我所前期研究中发现，肝癌患者癌旁组织中的巨噬细胞集落刺激因子(M．CSF)在肿瘤边缘浓度最高，癌旁组织中M．CSF和巨噬细胞增多与患者预后不良相关；在巨噬细胞与黑色素瘤的相关研究中，发现肿瘤侵袭边缘的CD68+巨噬细胞密度与患者预后负相关。这些现象提示可能在肿瘤侵袭边缘区

5、域，巨噬细胞通过分泌某些细胞因子增加这些区域中肿瘤细胞的侵袭转移能力，而促进其复发及转移。巨噬细胞在人肝癌塑塑圭壅：塑璧壁壅型茎些主塑堡里垄茎塑型堕翌壅生苎塑茎_●__---_●_____--_●___-_●-___--l____--●_●_____-______-●-●-●___-_-—————————————一一——一。目前，关于肿瘤相关巨噬细胞与人肝癌细胞EMT二者之间的联系尚无相关研究。本研究通过体外建立入巨噬细胞与人肝癌细胞系共培养系统，系统性地研究巨噬细胞对肝癌细胞发生EMT的影响及其相关分子

6、机制。并通过抗体芯片的方法筛选可能起相关作用的细胞因子，进一步通过组织微阵列技术，对肝癌微环境中相关炎症因子的分析，确定主要的细胞因子，对可能的细胞信号通路进行验证，初步阐明在人肝癌组织中巨噬细胞引发肝癌细胞EMT的现象与机制，为肝癌的发生发展和治疗提供新的理论支持。本课题分为三部分：1、人巨噬细胞对不同转移潜能人肝癌细胞系生物学特性影响的研究；2、巨噬细胞对人肝癌细胞上皮．间质样表型影响的研究；3、巨噬细胞分泌的IL．8对人肝癌细胞上皮．间质样表型影响及相关机制的研究。星堕塑堕垄△墅堕塑丝圭鏖：塑堕壁塞

7、型茎些主塑堡用及其机制的研究中文摘要————————————————————————————————=—=二二二=二二．!金：!!兰第—部分人巨噬细胞对不同转移潜能人肝癌细胞系生物学特性影响的研究目的：研究人巨噬细胞对不同转移潜能人肝癌细胞系生物学特性的影响，初步探索巨噬细胞与人肝癌细胞系生物学特性改变的相关性。方法：首先将人白血病单核细胞系THP．1，经过佛波酯刺激后分化成为巨噬细胞；其次选择人高转移潜能肝癌细胞系MHCC．97H，MHCC．97L与人低转移潜能肝癌细胞系Hep-G2，Huh．7，于六孔

8、板小室中与巨噬细胞共培养，观察其生物学形态改变；应用细胞划痕实验检测共培养体系中肝癌细胞运动迁移能力；应用Transwell侵袭小室检测共培养体系中肝癌细胞对的侵袭能力。结果：巨噬细胞与人肝癌细胞系共培养之后，细胞形态发生显著改变，运动迁移能力增强，对基底层的侵袭能力增强。结论：巨噬细胞可能通过某些细胞因子增强人肝癌细胞系的运动及迁移侵袭能力。第二部分巨噬细胞对人肝癌细胞上皮．间质样表型影响的研究目的：研究巨噬细胞对人肝癌细胞