椪柑枯水应答基因表达研究

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1、西南大学硕士学位论文椪柑枯水应答基因表达研究姓名：杨明申请学位级别：硕士专业：果树学指导教师：王日葵20120603西南大学硕十学位论文摘要桠柑枯水相关基因表达研究果树学专业硕士研究生杨明指导教师王日葵副研究员摘要枯水(section．drying)是柑橘贮藏过程中普遍发生的生理病害。果实发病后，果肉水分减少，风味变淡，果实重量明显降低，从而严重影响柑橘产业的经济效益。本试验以栈柑为试材，构建桠柑枯水相关基因的抑制差减杂交cDNA文库，通过对文库的筛选、克隆测序、功能分析以及实时定量RT-PcR验证，获得了桠柑枯水应答基因，这些基因反映了果实对枯水的调控

2、情况，可作为今后防治枯水病害的候选基因。利用抑制性差减杂交技术以槿柑正常果肉cDNA作为对照组(Driver)，以枯水果肉cDNA作为实验组(TeSter)，成功构建了一个正向差减文库，挑选了300个有效克隆进行测序分析，260个测序成功。BLAsTX比对分析发现，获得的260条表达序列标签(EsTS)中有63条EsTS同源性较低或没有同源性，有197条EsTs找到了分属于52个功能已知基因的同源序列。这些差异表达基因主要涉及衰老、抗逆防御、几丁质和细胞壁代谢、蛋白降解等过程。以B．actin基因作为内参基因，对文库中编码B．微管蛋白、衰老相关蛋白、细胞

3、色素c、半胱氨酸蛋白酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶、转运蛋白、天冬氨酸蛋白酶前体、wRKY转录因子21的基因进行实时定量RT．PcR验证，结果发现：这8个基因均有明显的上调表达。其中编码B．微管蛋白与衰老相关蛋白的基因上调表达8倍左右；编码细胞色素c、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的基因上调表达5倍多；编码半胱氨酸蛋白酶、转运蛋白的基因上调表达2倍左右；而编码天冬氨酸蛋白酶前体、转录因子21的基因表达量均有极明显的上升，分别上升了350倍和120倍。关键词：槛柑，抑制性差减杂交，枯水，表达序列标签，差减文库，聚类分析西南大学硕士学位论文Abs昀ctExpressio

4、nofSection-dryingGenesinPonkanmandarinMasterCandidate：Y．angMingAdVisor：AssociateProf．WanglUKuiAbstractSection-dr)，ingismewidespreadoc㈣ceofphysi010百caldisordersinc胁lsduringstorage．After枷tmorbidit=儿fImitpulpmoisturedecreased，meflavorfIades，小Jitweightw鹊si911i矗c锄tlyreduced，therebyse矗

5、ouslyaf．fectingnleeconomice伍Ciencyoft11eci仃usindustry．Thisexp幽enttakesPorlkancitrl嘴硒material，C0ns虮lctsasub昀ctiVelb，b^dizationcDNA1ibra吼aIld0btainsnlePoIlkaIlci缸1lsSection．dr灿ggeIlesbylibraDrscraellin舀clollinga11dscquencin舀矗mctionala11alysis锄dreal-timequantitatiVeRT—PCRconfiImatio

6、n．Theseg％esreneCtedmeregulationofpulpt0Section-dryin岛aIldcallbeusedtopreVentthedisorderofSection-dr扛ng嬲candidateg吼es．Asuppressionsub打actiVeh)7：brjdizationlibra巧w鼬constn】ctedusiI玛cDNAsynⅡlesized疔omRNAex仃acted丘．omno肌a1pulp嬲driVcraIldSection-d聊ngpu岫aSteSter．Atotalof300positiVeClones

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