土壤中分解尿素的细菌的分离和计数学案

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1、3、土壤微生物主要分布在距地表cm的近性土壤中，约—等。为细菌。课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学习目标：利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决牛产牛活中有关微牛物的计数。重点与难点：对土样的选収和选择培养基的配制、对分解尿素的细菌的计数自主预习一、课题背景1、尿素是一种重要的氮肥，农作物（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为，这是因为细菌能合成02、科学家能从热泉屮把耐热细菌筛选出来是因为这样也适用于实验室中微生物的筛选，原理是o点评：生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。K思考诃

2、在该培养基配方屮，为微生物的生长提供碳源的是,提供氮源的的是,琼脂的作用是OK思考2》该培养基对微生物（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是O3、在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是o除此之外，也是测定微生物数量的常用方法。【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。公式：观察到的红细胞平均数：观察到的细菌平均数=红细胞含量：细菌含量4、采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于o通过统计,就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。K思考3》从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计

3、算方法是。K思考4』利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是oK思考5》第—位同学的结果接近真实值。你认为这两位同学的实验需要改进的操作是。5、统计的菌落数比活菌的实际数目o这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是菌落。因此，统计结果一般用来表示。6、设置对照的主要目的是o7、对照实验是指除了的条件外，其他条件都的实验。满足该条件的称为,未满足该条件的称为组。K思考6》请设计本实验的对照实验组：二、实验设计1、实验设计的内容包括2、根据图示2-7填写以下实验流程:4、分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是,其FI的是保证获得的平板。细菌稀释度为,放线菌稀

4、释度为,真菌稀释度为O5、培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌一般在°C培养1〜2d,放线菌一般在°C培养5〜7d,霉菌一般在°C的温度下培养3〜4d。6、在菌落计数时，每隔h统计一次菌落数目。选取时的记录作为结果，以防止因而导致遗漏菌落的数目。点评：菌种中有些菌体增殖快，有些菌体增值慢，所以培养时间要充足，使得每个菌体都能形成肉眼可观察到的菌落。7、菌落的特征包括等方面。K思考7』土壤微生物种类最多、数量最大的原因8、实验过程1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要o2）应在旁称取土壤—g。将称好的土样倒入盛有汕无菌水的中，塞好棉塞。3）在稀释土壤溶液的过程

5、中，每一步都要在旁进行。4）实验时要对作好标记。注明等。5）为了提高效率，在操作吋更加有条不紊，应当oK思考8』在研究未知微生物时务必规范操作，以防被感染，实验后一定要洗手。三.结果分析与评价1、对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助的方法。2、在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的将尿素分解成了—。氨会使培养基的碱性，PII。因此，我们可以通过检测培养基变化來判断该化学反应是否发生。3、在以为唯一氮源的培养基屮加入指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变，说明该细菌能够。K思考9』测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到—培养基

6、上培养，大肠杆菌菌落呈现,通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。你认为在该实验中至少应収个水样。（三）课堂总结、点评参考答案：一、基础知识1.不能氨和C02腺酶2.热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物原理是：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括-营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。K思考1』葡萄糖尿素凝固剂K思考2』具有只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长3.稀释涂布平板法显微镜直接计数4.样品稀释液屮一个活菌平板上的菌落数30〜300K思考33（平均菌落数宁涂布的稀释液体积）X稀释倍数K思考恰当的稀释度K思考5』二第一位同学需设置重复实验组；第

7、二位同学统计的三个菌落数相差太大，说明操作有误，需重新实验5.低一个菌落数6.排除实验组中非测试因素对实验结果的彫响，提高实验结果的可信度7.被测试相同对照组实验K思考6』方案1：其他同学用A同学的土样进行实验。方案2：A同学以不接种的培养基作为空白对照。二.实验设计1.实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。2.根聾图示2—7填写学下实验流程：配制土壤溶液刊系列稀释T涂布平板与亲卜t菌落计数3.3〜8cm近中70%〜80%4.不同微生物在土壤中含量不同，菌落数在30〜300之间、适于计数10"、10106,10'、10