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时间:2019-02-07
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1、涮H太学2㈣年磺士毕业沦文一蝴形檀黜啉斥捌咖电凋亡与诱导坠呻【化氟铺I(iNOS)关系畦乓骝旰究心脏移植急性排斥期细胞凋亡与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)关系的实验研究研究生张岩导师郅兴义郑州i大学第一附属医院心血管外科郑州450052摘要背景与目的:心脏移植(hearttransplantation)是目前治疗各种终末期心脏疾病的有效方法。但心脏移植后的急性、慢性排斥反应一直是阻碍心脏移植广泛应用的最重要因素。已知在移植排斥中,由T细胞介导的细胞毒作用和迟发型过敏反应是主要机制,以细胞肿胀、细胞膜破裂而引起的心肌细胞坏死而引起周围组织的炎症反应是其特点。资料表明,在
2、排斥反应期,细胞既有坏死又有凋亡存在。细胞凋亡是移植后急性排斥期心肌损伤的一个重要机制。己知有多种因素参与心脏移植急性排斥期的细胞凋亡,如氧化应激,自由基等。但有关急性排斥期心肌细胞凋亡的具体机制还未完全阐明。研究表明:在急性排斥期间,细胞凋亡与诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase,iNOS)的表达相一致,提示细胞凋亡有可能通过一氧化氮及过氧亚硝酸盐引起心肌组织损伤。本实验通过建立改良的Ono大鼠心脏腹腔异位移植模型,应用iNOS抑制剂氨基胍(Aminiguanidine.AG)对心脏移植后的实验动物模型进行预处理,观察心肌组织
3、损伤及细胞凋亡,测定移植心脏的iNOS活性情况,从而探讨AG在心脏移植急性排斥期的作用,并寻找抑制细胞调亡的途径,从而延长移植心的存活时间及功能,为临床实践提供理论依据。材料与方法:采用成年健康封闭群大鼠,体重在260~3009,平均280±109。以Wistar大鼠为受体,SD大鼠为供体,建立大鼠腹腔异位心脏移植模型。设A组:Wistar到Wistar大鼠为同系移植对照组,术后每日一次生理盐水lml皮下注射;B组:删H大学:。【)_j年赜士毕业睑文,悯捌啪劁生爿}斥脚胞d虻与诱导里坤弛舞台酶(iNOS)关系批瑰研究SD到Wistar大鼠为同种移植组对照组,术后每日一
4、次生理盐水lml皮下注射;c组:AG实验组,术后AG每日一次按lml(600mg]kg)皮下注射。各组分别在术后第3,5,7天采集移植心脏,取移植心肌的心室组织。移植心肌标本进行组织病理学检查(按stanlbrd分级标准,HE染色)及细胞凋亡检测(原位末端标记技术之TUNEL法)和心肌组织中iNOS活性的测定。统计方法:在微型计算机上用SPSS软件包(10.0版)进行统计学处理。计数资料均以ziS表示,急性排斥反应的组织学分级采用秩和检验;细胞凋亡指数(apoptoticindex,AI)及心肌iNOS活性检测采用单因素方差分析;以d=O.05为差异显著性的检验标准。
5、结果:1.移植心肌组织病理学改变大鼠心脏移植急性排斥反应时的病理学改变的发生发展是从心外膜开始,逐渐向心内膜发展的。A组移植术后直至第7天,移植心肌的组织结构基本正常,心肌问质中仅有少量散在淋巴细胞浸润,各时间点之间无统计学意义(P:o.42)。B组第3天移植心脏心肌组织傲切片检查,心肌间质中仅少量淋巴细胞浸润,与A组同~时间相比-无统计学意义(P=o.24),而到第5天,第7天,B组移植心脏心肌组织切片中可见心肌间质水肿和灶性心肌坏死,淋巴细胞数量明显增多,第7天尤甚,组内各天比较有统计学意义(P<0.01);与A组同一时间相比,有统计学意义(尸6、治疗后,C组移植心脏心肌组织结构破坏减轻,心肌间质中可见散在的淋巴细胞浸润、水肿,无明显的片状心肌坏死,第5天,第7天与B组比较,有统计学意义(P7、毕业论文心脏移植急性排斥期细胞蔺亡与诱导型—舞化氯者酶(iNOS)关系的实验研究B组相比,iNOS活性有统计学意义(Po.05)。术后第五天,A组与B组相比,iNOS活性有统计学意义(Po.05)。术后第7天,A组与B组相比,iNOS活性有统计学意义(P0.
6、治疗后,C组移植心脏心肌组织结构破坏减轻,心肌间质中可见散在的淋巴细胞浸润、水肿,无明显的片状心肌坏死,第5天,第7天与B组比较,有统计学意义(P7、毕业论文心脏移植急性排斥期细胞蔺亡与诱导型—舞化氯者酶(iNOS)关系的实验研究B组相比,iNOS活性有统计学意义(Po.05)。术后第五天,A组与B组相比,iNOS活性有统计学意义(Po.05)。术后第7天,A组与B组相比,iNOS活性有统计学意义(P0.
7、毕业论文心脏移植急性排斥期细胞蔺亡与诱导型—舞化氯者酶(iNOS)关系的实验研究B组相比,iNOS活性有统计学意义(Po.05)。术后第五天,A组与B组相比,iNOS活性有统计学意义(Po.05)。术后第7天,A组与B组相比,iNOS活性有统计学意义(P0.
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