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时间:2019-02-04
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1、2018年第35卷第1期真鲷虹彩病毒LAMP检测方法的建立袁向芬,石素婷,吕继洲,吴绍强(中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所,北京 100176)摘 要:为建立一种检测真鲷虹彩病毒的环介导等温扩增(LAMP)方法,满足口岸、养殖场对该病的快速监测的需求,本研究比对分析了GenBank中公布的真鲷虹彩病毒基因组序列,筛选其主要衣壳蛋白MCP基因保守区序列,进行LAMP引物设计,建立了真鲷虹彩病毒LAMP检测方法。对扩增条件进行优化,确定最佳反应条件为62℃,45min。灵敏度试验结果显示,该方法最低检测限为1
2、00拷贝/μL目的基因。特异性试验结果显示,该方法不与流行性造血器官坏死病毒(EHNV)、蛙病毒3型(FV3)、甲鱼虹彩病毒(STIV)发生交叉反应。结果表明,本研究建立的LAMP方法具有良好的敏感性和特异性。对5份疑似真鲷虹彩病毒感染的临床样品进行检测,发现检测结果与世界动物卫生组织(OIE)推荐的PCR方法检测结果符合率为100%。研究表明,本方法具有灵敏度高、特异性强,以及仪器设备简单、操作便捷、结果直观等优点,非常适合作为初筛手段,应用于养殖场、口岸等一线的疫病监测。关键词:水生动物疫病;真鲷虹彩病毒
3、;环介导等温扩增;快速检测中图分类号:S852.65 文献标识码:A 文章编号:1005-944X(2018)01-0095-05DOI:10.3969/j.issn.1005-944X.2018.01.026EstablishmentofLAMPforDetectionofRedSeaBreamIridovirusYuanXiangfen,ShiSuting,LüJizhou,WuShaoqiang(InstituteofAnimalQuarantine,ChineseAcademyofInspecti
4、onandQuarantine,Beijing100176,China)Abstract:TodevelopaLoop-mediatedisothermalamplification(LAMP)methodofRedseabreamiridovirus(RSIV)forrapidmonitoringofthediseaseatportofentryandfishery,theRSIVgenomesequencepublishedinGenBankwascomparedandanalyzed.Theconserva
5、tiveregionsequenceofthemaincapsidproteinMCPgenewasscreenedout,theLAMPprimersweredesigned,andLAMPfordetectionofRSIVwasestablished.Theconditionsofamplificationwereoptimized,andthebestreactionconditionwas62℃,45min.Sensitivitytestresultsshowedthattheminimumdetec
6、tionlimitforthismethodwas100copies/µL.SpecifictestresultsshowedthatthismethoddidnotcrossreactionwithEHNV,FV3andSTIV,withgoodsensitivityandspecificity.Bydetectionof5clinicalsamples,resultsshowedthatthecoincidencerateofthetestresultswiththatofthePCRmethodrecomm
7、endedbyOIEwas100%.Thismethodwasarapid,simple,specificandsensitiveassaywithsimpleinstrumentsandvisualizationresults,whichwassuitableforbeingusedasascreeningmethodformonitoringdiseasesatportsandfishfarms.Keywords:aquaticanimaldiseases;Redseabreamiridovirus;Loop
8、-mediatedisothermalamplification(LAMP);rapiddetection真鲷虹彩病毒(Redseabreamiridovirus,年首次在日本四国岛的人工养殖患病真鲷中被发RSIV)属于虹彩病毒科(Iridoviridae)、细胞肿现[3],主要感染真鲷、花鲈、条石鲷等30余种海[1-2]大病毒属(Megalocytivirus)。该病毒于1990[4-5]水鱼类。患
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