四川某规模化猪场仔猪腹泻病的诊疗体会

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1、四川省畜牧兽医学会2012年学术年会敏纸片购于杭州微生物试剂有限公司：RT-PCR(反转录)试剂盒、2×TaqPCRMasterMix、DNA分子量标准等购自北京天根生化科技有限公司，RNAisoPlus购flTaKaRa宝生物工程(大连)有限公司，其它试剂实验室制备。1．3引物的设计与合成猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎及猪轮状病毒的引物和检测方法由四川农业大学动物生物技术中心设计建立，引物由上海英俊生物技术有限公司合成。1．4病原学检测提取病料的总RNA方法依照RNAisoPlus说明书，根据RT—PCR试剂盒说明书，采用lOlL反应体系进行病毒cDNA合成反应，采用

2、20虬反应体系按照下列扩增条件进行PCR检测猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎及猪轮状病毒：95V预变性5min，95。C循环变性30s，55V退火复性30s，72℃延{申30s，30个循环数，72。C末延伸lOmin，最后4℃保存，反应结束后产物经1％琼脂糖凝胶电泳。1．5细菌分离鉴定将无菌采取的肝、肺及小肠组织分别接种于普通LB琼脂平板、血清LB琼脂平板、麦糠凯琼脂平板和10％兔鲜血琼脂平板，37。C培养，观察菌落形态及是否具有溶血性，并挑取单个菌落进行革兰氏染色镜检、生化鉴定，方法及判定结果参考文献进行。1．6细菌致病性实验用无菌生理盐水将典型菌落新鲜纯培养物稀释No

3、．5麦氏比浊管(1x108CFU／m1)，吸取稀释菌液0．2m1分别腹腔注射健康小鼠，总体设空白对照鼠，腹腔注射无菌生理盐水O．2ml，隔离饲养，观察其发病及存活情况。及时解剖死亡小鼠，对肝脏进行细菌的分离、染色、镜检。方法及结果判定参考文献进行。1．7耐药性监测对鉴定为致病性大肠杆菌进行药敏试验，试验采用美国临床实验室标准委员会CLSI推荐的K—B法进行，结果判定依据杭州微生物试剂有限公司药敏试验纸片法的抑菌范围解释标准进行。2结果与分析2．1病原学检测结果将PCR产物进行1％琼脂糖凝胶电泳，结果见图1。由图1可见，采用设计的引物对患猪病料进行PCR扩增，扩增出猪传

4、染性胃肠炎病毒条带，没有扩增出猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒条带，表明患猪有猪传染性胃肠炎病毒感染。Ml，1416图1病毒RT-P隙扩增结果注：M．DNA标准分质量DL2000Marker：1．TGEV：2．PEDV：3：猪轮状病毒第三篇疾病防治2．2细菌鉴定37"C培养12h后，血清LB平板、普通LB平板均长出表面隆起、圆滑、半透明的菌落：在兔鲜血琼脂平板上呈13溶血：麦康凯平板上的菌落呈红色：伊红美蓝琼脂平板上形成紫黑色、具金属光泽菌落。挑取单个菌落经革兰氏染色呈阴性、杆菌，生化鉴定结果符合大肠杆菌特性，综合判定优势致病菌为大肠杆菌。2．3致病试验及药敏试验对分离出

5、的典型大肠杆菌进行致病性试验，接种试验小鼠24h内死亡，对照组正常，取死亡小鼠肝脏及小肠分离到原接种菌，由此证明所分离大肠杆菌有致病性。表1分离细菌对14种常见药物的敏感试验由表l可见，分离的大肠杆菌对林可霉素、氧氟沙星高度敏感，对磺胺间甲氧苄啶、氟苯尼考、强力霉素、环丙沙星、痢特灵、头孢噻呋钠、复方新诺明等低敏或不敏感。3防治措施根据流行病学调查、临床症状观察、病畜剖检和实验室诊断得出结果为猪传染性胃肠炎继发感染溶血性大肠杆菌。对该场采取控制措施如下：①对全场猪舍、环境的卫生进行消毒，特别是产房及母猪进行卫生清洁和护理，消毒药物可采用0．3～0．5％的过氧乙酸等：②

6、对怀孕母猪产前20d注射猪传染性胃肠炎和流行性腹泻二联苗，对未发病仔猪预防接种0．5mL／头：⑨对仔猪按lmL0．5％樟脑磺胺酸、2mL5％碳酸氢钠和2mL维生素C及lOOmL5％葡萄糖生理盐水体系进行静脉输液，2次／d，连续3d，饮水中加入补液盐及黄芪多糖：④对患病母猪饲喂黄芪多糖等提高免疫力自然康复，对脱水严重的病猪，静脉注射5％葡萄糖生理盐水和5％碳酸氢钠水溶液等：⑤选取在药敏试验结果中敏感性高的林可霉素和氧氟沙星对病猪按说明书剂量及方法给药治疗。4讨论在生产中，猪的传染性胃肠炎和流行性腹泻是引起仔猪发生呕吐、腹泻和脱水的常见传染病，两者均是由冠状病毒引起的、临

7、床症状、流行病学、病理变化极其相似的疾病，常继发细菌性混合感染，加重病情，难于鉴别诊断。国内目前对这2种病的鉴别诊断方法主要有病毒中和试验、免疫荧光法、免疫电镜法、ELISA法和RT一417四川省畜牧兽医学会2012年学术年会PCR法等。ELISA法和RT—PCR法以其敏感性高、特异性强等优点赢得了各界人士的认同。在本次诊断中正是利用RT—PCR法对病料进行高效、快速、准确的诊断，为养殖场对病情的掌控，及早采取防治措施赢得先机，减少经济损失。由于病毒感染后常引起免疫抑制病，饲养管理不良，使猪群抵抗力普遍下降继发细菌感染。在实际生产中，由于大量药物的乱