NYT560-2002-小鹅瘟诊断技术.pdf

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1、11.220BIC4S1中华人民共和国农业行业标准NY/T560--2002小鹅瘟诊断技术Diagnostictechniquesforgoslingplague2002一08一27发布2002门2一01实施中华人民共和国农业部发布NY/'r560-200201J吕小鹅瘟又称鹅细小病毒(gooseparvovlrus)病，或又称德兹西氏病(Dcrzsy's病)，是雏鹅的一种急性败血性传染病。我国和世界上所有养鹅的国家均有此病的流行发生.本病主要侵害三周龄以内雏鹅，多呈最急性和急性病病程而迅速致死。三周龄以上的雏鹅仅部分发病，并

2、呈亚急性病程。本病一旦发生流行常引起大批雏鹅死亡，造成重大经济损失本病的病原称为小鹅瘟病毒，根据其病毒分类地位，又称鹅细小病毒。应用中和试验、琼脂扩散试验等力法证明个国各地分离的毒株具有相同的抗原关系，即仅有一个抗原型。与匈牙利的Derzsy's病毒株和番鸭细小病毒有密切抗原关系，而与哺乳动物和其他禽类的细小病毒没有抗原关系。据国内外有关报道，本病病毒分离常用鹅胚和番鸭胚。鹅胚和番鸭胚原代细胞感染病毒后，用伊红一苏木素染色，可见有CowdreyA刑核类包涵体和合胞体的形成用电镜或特异的鹅细小病毒抗血清中和试验能确定感染细胞内病

3、毒的存在本标准的附录A、附录B均为规范性附录。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准山全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位:扬州大学畜牧兽医学院。本标准主要起草人:王永坤、严维巍、朱国强、周继宏、庄国宏。NY/'r560--2002小鹅瘟诊断技术范围本标准规定了小鹅瘟诊断技术要求。本标准所规定的病毒分离方法适用于小鹅瘟病毒分离;琼脂扩散试验、中和试验和酶联免疫吸附(EIASA)试验等血清学诊断方法适用于病毒分离株的鉴定、鹅群检疫、流行病学调查和免疫鹅群抗体水平的检测2病毒分离鉴定2.1材料准备2门门以无菌手术取患病雏

4、鹅或死亡雏鹅的肝、胰、脾、肾、脑等内脏器官病料放置灭菌的玻瓶冻结保存，作为病毒分离材料。2.1.2先将病料组织剪碎、磨细，用灭菌生理盐水，或灭菌pH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)作(I，5)一(1:10)稀释，经3000r/min离心30min，取上清液加人抗生素，使每毫升组织液含有2000IU青霉素和2000pg链霉素，于37C温箱作用30min，作为病毒分离材料2.1.3将F述离心的上清液按4:1加人分析纯三氯甲烷充分混匀后放置37'C'温箱作用60min，或4C'冰箱过液，经3000r/min离心30min，取上清液加人抗

5、生素，使之每毫升含有2000IU青霉素和2000pg链霉素，于37'C温箱作用30min，作为病毒分离材料。2.2病毒分离2.2.1鹅胚接种将L述病毒分离材料接种5枚12日龄无小鹅瘟抗体的鹅胚，每胚尿囊腔接种。.2ml，置37C一38'C孵化箱内继续孵化，每夭照胚2-4次，观察9d，一般经5d^-7d大部分胚胎死亡。72h以前死亡的胚胎废弃，72h以后死亡的鹅胚取出放置4C-8C冰箱内过夜冷却收缩血管。用无菌手续吸取尿囊液保存和作无菌检验，并观察胚胎病变。无菌的尿囊液冻结保存作传代及检验用。2.2.2番鸭胚接种将上述病毒分离材

6、料接种5枚12日龄无小鹅瘟抗体的番鸭胚，每胚尿囊腔接种。2m工，置37C一38C孵化箱内继续孵化，每天照胚2-4次，观察9d，一般经5d-7d大部分胚胎死亡。在72h以前死亡的胚胎废弃，721:以后死亡的番鸭胚取出放置4'C-8C冰箱内过夜冷却收缩血管。用无菌手续吸取尿囊液保存和作无菌检验，并观察胚胎病变。无菌的尿囊液冻结保存作传代和检验用。接种后7d内未见死亡的鹅胚或番鸭胚取出后人4'C-8'C冰箱内过夜冷却收缩血管。用灭菌手续吸取尿囊液育传一次2.2.3病变由本病毒致死的鹅胚和番鸭胚具有相同的大体肉眼病变。绒尿膜增厚，全身

7、皮肤充血，翅尖、趾、胸部毛孔、颈、咏旁均有较严重出血点，胚肝充血及边缘出血，心脏和后脑出血，头部皮下及两肋皮下水肿接种后7d以上死亡的鹅胚和番鸭胚胚体发育停顿，胚体小2.3病毒鉴定用鹅胚绒尿液分离病毒与已知抗小鹅瘟病毒标准血清，或抗小鹅瘟病毒单克隆抗体，在无小鹅瘟抗体的鹅胚中作中和试验;用已知抗小鹅瘟病毒标准血清在易感雏鹅作保护试验;也可应用琼脂扩散试验NY/T560---2002和ELISA等方法鉴定病毒。方法见本标准的第3章和第5章。3琼脂扩散试验3门材料准备3.1.1标准阳性血清、抗小鹅瘟病毒单克隆抗体、标准阴性血清。3

8、.1.2标准琼扩抗原。3.1.3被检血清，无菌手续采取血液，分离血清，按。.0100量加人硫柳汞防腐，冻结保存待检。3.1.4被检抗原:制备方法见附录Ao3.1.5琼脂板:取1.0g优质琼脂或琼脂粉加100mLpH7.8的8%抓化钠溶液，加热使其完全溶解后加人1mL1%的硫柳