应用二代测序技术招测罕见病的遗传学研究

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1、应用二代测序技术招测罕见病的遗传学研究张宁孙艳美罗艳王方娜张明明王莉高健李亚河北省人民医院生殖遗传科河北省人民医院检验科河北省人民医院产科关键词：二代测序;基因突变;7TRK1基因;BTK基因；作者简介：李亚丽，050051石家庄市，河北省人民医院生殖遗传科;E-mail:lyl8703@sina.com收稿日期：2017-07-03基金：河北省科学技术硏究与发展计划项目（编号:17277728D）Received：2017-07-03罕见病Fl前国际上对其没有统一的标准，一般指临床发病率低，较少见的疾病。罕见病在欧洲定义是发病率＜1/2000的，在美国指患病人数〈20万的

2、疾病，而中华I矢学会遗传学分会2010年将那些患病率＜1/500000或新生儿＜1/10000发病率的疾病定义为罕见病［1-引。二代测序技术能够平行对多个靶基因进行测序，目前开始逐渐应用在在符合孟德尔遗传罕见病的研究匕违1。本研究应用二代测序法对2例临床罕见病患者进行基因筛查，以期明确病因。1临床资料1.1病例1：女，32岁。因“幼吋2次骨折、无痛无汗”欲生育而进行遗传咨询。自幼吋起患者就从未感知到过疼痛和外界的温度，幼时有过2次骨折，当时均未有任何疼痛感觉，从未有出汗情况，经常发生高热，伴有肌张力减退。其余外观和智力发育等均未见异常。家族中无相同或相似患者。现与一正常男性

3、结婚，准备生育,担心牛育与其相同孩了，前来咨询，要求查找病因。结合临床考虑先天性无痛无汗症或成骨发育不全，进行相关基因的二代测序，结果发现由NTRK1基因突变引起，患者NTRK1基因中存在c.287+2dupT杂合突变和c.851-33T>A杂合突变,从而明确诊断为先天性无痛无汗症。1.2病例2:男，5岁，因“反复发热感染”耍求查找病因而就诊。患儿生后7个月即因肺炎感染住院治疗，之后反复发热感冒，淋巴结肿大，3年前出麻疹，4个月前起皮肤瘙痒严重，2个月因发热、流涕腹痛住院，辅助检查:免疫球蛋白-A（IgA）0.09g/L（正常值0.34^1.38g/L）,免疫球蛋白-G4.

4、910.09g/L（正常值5・0~10・6g/L）,免疫球蛋白-M0.02g/L（正常值0.44^1.44g/L），总T细胞91.7%（正常值60%~82%）,抑制性T细胞45.3%（正常值20%~35%），总B细胞0.3%（正常值5%~18%）。患儿父母同龄身体均健康，25岁足刀顺产此患儿,为第一次孕产，牛后评分正常。无家族史。患儿父母为避免再次牛育此类患儿,前来就诊要求查找患儿发病机制。结合患儿临床，进行免疫缺陷病相关基因的二代测序，实验结果发现患儿BTK基因cl573G>A位点发生突变，明确诊断X-连锁无丙种球蛋白血症I型。2讨论先天性无痛无汗症（CIPA）是一种遗传

5、方式为常染色体隐性遗传病的罕见病。通常临床表现全身无汗、对疼痛和温度没有感觉。由于对疼痛和温度无感知，故容易受到反复严重的外伤;无法出汗，经常会引起高热和热性惊厥的发作。目前CIPA发病机制尚不明了，有研究认为神经营养因子酪氨酸激酶受体1型（NTRK1）基因突变可引起本病回。NTRK1是神经生长因子的高亲和力受体，一旦发生NTRK1基因突变不仅能影响NTRK1和NGF的结合，也可引起细胞内结构参与信号转导的阻滞本研究中的患者的NTRK1基因c.287+2dupT杂合突变和c.851-33T>A杂合突变，均为IIGMD报道的已知致病性突变。CIPA属于临床罕见病，很多临床医师

6、对CIPA认识往往不足，多数就诊原因为高热或者骨折，容易造成误诊、漏诊，因此加强对该病的认识，早期诊断，早期干预，才能最大程度避免不必要的伤害。X-连锁无丙种球蛋白血症（XLA）是一种罕见的X染色体隐性方式遗传的免疫缺陷疾病，均为男性发病。一般认为B细胞浆内Bruton酪氨酸激酶（BTK）基因发生突变导致B细胞分化受阻，从而外周血中成熟B细胞含量极低，血液中无丙种球蛋白，造成机体免疫力低下，故主要临床症状是反复细菌感染，如复发性中耳炎和呼吸道、肠道、皮肤感染等宜。关节炎可见于10%飞0%的XLA患者，通常表现单一大关节炎，多关节炎非常罕见，目前仅有5例报道。通常XLA都是点

7、突变引起，近來Sharma等回报道了1例2757个碱基的大缺失，外显子8、9、10均缺失，这比较罕见。一般生后6个月后，在母源性免疫抗体小时候，患儿即开始反复感染。目前研究发现XLA致病基因所编码的蛋白属于酪氨酸激酶家族,称为BTK,任何位点的BTK基因发牛突变均能使其功能障碍，造成B细胞的分化过程阻滞，外周血中成熟B细胞因而减少曲。本研究中患儿自七个月起即反复呼吸道感染，皮肤反复感染致使其上下肢上满布皮疹，实验结果发现患儿BTK基因cl573G>A位点发生突变，Sanger测序验证患儿母亲携带BTK基因cl573