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时间:2019-01-09
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1、基于PCR技术的水貂毛皮鉴别研究 摘要:本研究应用荧光PCR技术鉴定水貂毛皮。方法建立:市场采购32件鞣制动物毛皮,提取足够的DNA,应用荧光PCR方法检测水貂成分;其中21件水貂毛皮检测到水貂成分,11件其他动物毛皮均未检出水貂成分,方法特异性达到100%。方法验证:市场采购10件毛皮服装样品,比较宏观法与PCR法结果;其中宏观法鉴定结果与PCR法一致,宏观法无法确定水貂的4件样品均可通过PCR法明确。本方法可用于水貂毛皮的鉴定,并作为宏观法的有效补充和验证。 关键词:水貂毛皮;鉴别;PCR方法 中图分类号:TS57文献标志码:A Identi
2、ficationofMinkFurBasedonPCRMethod Abstract:ThestudyrelatestotheidentificationofminkfurbasedonPCRmethod.TestmethodwasestablishedbyextractingenoughDNAfrom32samplesoftannedanimalfurfrommarketandemployingthePCRmethodtoidentifythesamples.Aftertesting,21sampleswereprovedtocontainkeyco
3、nstituentofmink,whiletheother11sampleswerecomponent-freebyPCRmethodwiththespecificationof100%.ThistestmethodwasvalidatedbycomparingtheresultsofconventionalandPCRmethodrespectivelyfor10furcoatsamplesfromthemarket.Theresultsofconventionalmethod7wereidenticalwithPCRmethod,and4sample
4、sthatcouldn’tbeidentifiedbytheconventionalmethodweremeasuredbythePCRmethod.Eventually,thePCRmethodcanbeusedinthefieldofidentificationoftannedminkfurandassupplementandverificationforopticalmethod. Keywords:minkfur;identification;PCRmethod 貂皮素有“裘中之王”之称,其种类繁多,有水貂、石貂、松貂、渔貂、扫雪貂等品种,其
5、中以水貂最为常见,紫貂最为名贵。目前,毛皮鉴定常采用宏观观察法和显微镜观察法,尚无可靠、稳定、可重复的标准鉴别方法。一些形态接近或经过特殊处理工艺的皮毛样品鉴定仍存在难点,如黄狼皮与水貂毛皮在电子显微镜下也难以区别。某些商家利用消费者缺乏皮毛知识和鉴别经验,在商品上标示山貂、黄金貂、艾狐貂、青根貂等近似的名称或类别,混淆消费者。因此,如何方便、准确、快速地鉴别毛皮种类一直是质检部门和广大消费者关注的焦点。 本研究拟探索在分子水平上实现物种鉴别,突破传统方法依据动物纤维形态结构鉴别的局限性,更加客观、稳定。但是,由于动物毛皮经过鞣制、漂白和染色处理,鞣制
6、皮张中的DNA高度降解,且含有大量的酶抑制物,因此提取足够量的DNA成为应用PCR检测的技术难点。本文通过研究鞣制貂毛皮的DNA提取技术,得到稳定可靠的DNA,利用PCR技术鉴别水貂毛皮,并与宏观观察法、显微镜观察法相比较,为貂毛皮的鉴别检测提供一个可靠的检测方案。 1材料与方法7 1.1材料与试剂 实验用水貂、紫貂、艾虎等鞣制动物毛皮购自大连某貂业有限公司、河北大营毛皮市场、桐乡皮草大世界;加工过程中的水貂毛皮购自桐乡某皮草有限公司。貂毛皮成衣购自河北大营毛皮市场、海宁皮革城和淘宝、京东等网络店铺。 裂解液:2%十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)
7、、1.4mol/LNaCl、0.1mol/LTris-HCl、0.02mol/L乙二胺四乙酸(EDTA)pH值8.0;DNA提取试剂盒(Roche,11796828001);PCR预混液PremixExTaq(TaKaRa,RR390)。 1.2仪器与设备 7500fast荧光定量PCR仪(美国ABI公司);6870冷冻研磨机(美国SPEXSamplePrep公司);DS-11超微量分光光度计(美国DeNovix公司);5415R离心机(德国Eppendorf公司)。 1.3方法 1.3.1鞣制毛皮DNA的提取 鞣制皮张在平整处取约4cm2,成
8、衣在腋下、底边处分别取样,各4cm2。将皮张剪成直径5mm左右小块,使用冷冻研磨
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