体外磁场定向迁移的间充质干细胞对脊髓损伤的治疗和gap-43表达的影响

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1、体外磁场定向迁移的间充质干细胞对脊髓损伤的治疗和GAP-43表达的影响郑希，李成鹏，王顺和(400016重庆，重庆医科大学：基础医学院病理学教研室1，干细胞与组织工程研究室2)[摘要]目的探讨体外磁场定向迁移尾静脉注射的SPIO标记的大鼠骨髓间充质干细胞（bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs）对大鼠脊髓损伤治疗的影响以及对脊髓中GAP-43表达的影响。方法体外培养SD大鼠BMSCs，流式细胞仪检测其免疫表型，超顺磁氧化铁颗粒（superparamageticironoxieds，SPIO）

2、标记BMSCs，普鲁士蓝染色测定SPIO标记率，台盼蓝染色检测标记细胞存活率，CCK-8检测标记细胞分裂增殖能力，Westernblot检测标记细胞干细胞标记物Nestin及GFAP表达。建立大鼠脊髓损伤（spinalcordinjury，SCI）模型，尾静脉注射移植细胞，对细胞移植后大鼠进行BBB评分。普鲁士蓝染色观察脊髓组织内标记细胞，TTC染色观察脊髓缺血损伤面积，WesternBlot检测损伤脊髓内GAP-43表达情况。结果原代BMSCs体外能成功分离、培养、传代，且流式细胞仪检测表达神经干细胞标记物不表达造血干细胞

3、标记物。普鲁士蓝染色显示SPIO标记率接近100%。台盼蓝染色显示标记细胞生存率与对照组无差异。CCK-8检测磁场下标记细胞增殖活性不受影响。Westernblot检测磁场下标记细胞表达Nestin及GFAP无差异，分化活性不受影响。普鲁士蓝染色观察磁铁组脊髓组织中BMSCs明显多于无磁铁组。TTC染色显示磁铁组缺血面积小于无磁铁组。Westernblot检测脊髓组织中同一时间点GAP-43表达，磁场组明显大于对照组及无磁场组。结论外置磁场可以定向更多SPIO标记的BMSCs到达脊髓损伤处，使其更好地发挥修复作用且上调GAP

4、-43的表达，利于脊髓损伤的恢复。[关键词]磁场；骨髓间充质干细胞；超顺磁氧化铁；脊髓损伤；迁移；GAP-43[中图法分类号][文献标志码]AEffectsoftargetdeliveryofsuperparamagneticironoxides-labeledbonemarrowmesenchymalstemcellsbyamagnetonaratmodelofspinalcordinjuryandtheexpressionofGAP-43preoteinZhengXi,LiChengpeng,WangShunhe(1De

5、partment.ofPathology,2LaboratoryofStemCellandTissueEngineering,InstituteofBasicMedicalSciences,ChongqingUniversityofMedicalSciences,Chongqing400016,China)[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectsoftargetdeliveryofmagnetfieldonSPIO-labeledbonemarrowmesenchymalstemc

6、ells（BMSCs）invitroandobservewhetherthemagnetfieldcouldpromotelabeledcellstargetedmigrationandreducethedamageareaofSCIinvivo.MethodsBMSCsfromSpragueDawley(SD)wereculturedinvitro.TheexpressionofCD29、CD45、CD54wascheckedbyFlowcytometricdetection.TheBMSCswerelabeledwith

7、SPIOandprussianbluestainingwasperformed.Theviabilityoflabeledcellswasevaluatedbytrypanbluestaining.CCK-8methodwasusedtodetecttheproliferationoflabeledcellswiththepresencemagneticfield.EffectsofmagneticfieldonthevitrodifferentiationoflabeledcellswereinvestigatedbyWe

8、sternBlotfordetectionoftheNestinandGFAPproteinexpression.RatswereinducedbyClipCompressionMethodtoestablishthespinalcoreinjurymodels.TheBMSCslabel