基因工程作业题及答案

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1、第二章1.名词解释：核酸内切酶、核酸内切限制酶、同裂酶、同尾酶、核酸外切酶、末端脱氧核苷酸转移酶答：核酸内切酶：是一类从多核苷酸链的内部催化磷酸二酯键断裂的酶。核酸内切限制酶：是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列（4—8bp），并由此处切割DNA双链的核酸内切酶。同裂酶：识别位点的序列相同的限制性内切酶。同尾酶：识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。核酸外切酶：是一类从多核苷酸链的一头开始催化降解核苷酸的酶。末端脱氧核苷酸转移酶：可以不需要模板，在单链DNA或突出的双链DNA3’-OH端随机添加

2、dNTPs的酶2.限制性内切核酸酶的命名原则是什么？答：限制性内切核酸酶按属名和种名相结合的原则命名的，即：属名+种名+株名+序号；首字母：取属名的第一个字母，且斜体大写；第二字母：取种名的第一个字母，斜体小写；第三字母：(1)取种名的第二个字母，斜体小写；(2)若种名有词头，且已命名过限制酶，则取词头后的第一字母代替。第四字母：若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而定，但用正体。顺序号：若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I、Ⅱ、Ⅲ、…等，用正体。3．部分酶切可采取的措施有哪些

3、？答：1）缩短保温时间2）降低反应温度3）减少酶的用量4.在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一个6bp的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么?答：回文序列是：5'-CATATG-3，5．什么是限制性内切核酸酶的星号活性?受哪些因素影响?答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因条件的改变会出现第二活性

4、的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星活性。概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量(>5％,v／v)；(2)限制性内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)；(3)低离子强度(<25mmol／L)；(4)高pH(8．0以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。第三章1．如何将野生型的l噬菌体改造成为一个理想的载体?答：①删除l噬菌体的非必需区，留出插入空间；并在余下的非必须区内制造限制酶切点②引进

5、某些突变表型，作为选择标记③突变某些基因，使它成为安全载体④删除lDNA必须区段上常用的限制酶切点2．什么是蓝白斑筛选法?答：这种方法是根据α互补的原理来筛选重组体。主要是在载体的非必要区插入一个带有大肠杆菌b—半乳糖苷酶的α基因片段（LacZ’），携带有lac基因片段的载体转入LacZ’－的宿主菌后，在IPTG（异丙基硫代-β-D半乳糖）诱导下，载体表达的b—半乳糖苷酶的α肽段和宿主菌表达的b—半乳糖苷酶的b肽段互补，形成有活性的b—半乳糖苷酶，该酶可以分解无色的5—溴—4—氯—3—引哚—b—D—半乳糖苷(X

6、-gal)得到蓝色的5—溴—4—氯—靛蓝，因此在含有X-gal平板上形成浅蓝色的菌斑。外源基因插人LacZ’(或LacZ’基因部分被取代)后，重组的克隆将丧失分解X-gal的能力，在含有X-gal的平板上形成白色的菌斑，非重组的克隆则为蓝色菌斑。3．M13系列载体具有哪些优缺点?答：（1）有MCS，便于克隆不同的酶切片段（2）Xgal显色反应，可供直接选择（3）可以克隆双链DNA分子中的每一条链4．辅助噬菌体DNA和相应的噬菌粒是如何协同工作的?答：虽然噬菌粒载体携带有M13的IG区，能够合成单链DNA，但是它

7、没有M13的功能基因，没有M13基因2的产物存在，所以不能合成单链DNA。而辅助噬菌体具有M13的所有功能基因，但是IG区是缺陷的，辅助噬菌体本身的DNA不能进行单链复制，于是就可以为噬菌粒提供基因2产物和包装蛋白。5．某一质粒载体具有Tetr和Kanr的表型，在Kan抗性基因内有一BglI的切点。现用BglI切割该载体进行基因克隆，问：(1)转化后涂皿时应加什么样的抗生素?(2)培养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型?(3)如何利用抗性变化筛选到含有插入片段的重组体?答：(1)加四环素；(2)TetrKans

8、和TetrKanr；(3)重新点种在含Tet、Kan和只加Tet的平板上，选择只在Tet平板上生长的菌落，即为所需的重组体。第四章1.目的基因的获取方法有哪些？各有什么优缺点？答：1）鸟枪法克隆：优点是可以随机克隆供体细胞的全基因组DNA片段；缺点是①工作量较大，需要了解目的基因的背景知识，②不能获得最小长度的目的基因，③不能除去真核生物目的基因的内含子结构2）cDNA法：优点是①能获