青蒿不同生长采收期青蒿素含量测定论文

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1、青蒿不同生长采收期青蒿素含量测定论文李春红，王琳，何兵，冯文宇，田吉，艾洪兵【摘要】目的制定出青蒿的最佳采收时间。方法用高效液相色谱（HPLC）法测定不同生长采收期青蒿素的含量。结果经实验测定，青蒿素的含量8月份最高，8月前随生长采收期的延长逐渐增高.freeletoharvesttheArtemisaAnnua.MethodsHPLCmethodtomeasurethecontentofArtemisininindifferentgroent,thetimeofthehighestcontentofArtemisininalharvesttimeofAr

2、temisininisinAugust.Keyisinin；Groisiaannual为菊科植物黄花蒿的干燥地上部分，具有清热解暑、除骨蒸和截疟［1］等功效，其主要有效成分为青蒿油和青蒿素等。现代药理研究表明青蒿油具有抗菌、消炎、镇咳和祛痰的作用［2］，还可以治疗神经性皮炎［3］，皮肤真菌病［4］和慢支炎［5］等疾病。青蒿素含有过氧基团的倍半萜内酯，具有截疟、抗菌、解热和增强免疫功能等药理作用［6］。因此，对青蒿素及其微生物的研究已经引起全世界药学工作者的关注。目前，对青蒿素含量测定方法的研究不多，作者用柱前衍生RPHPLC法测定不同生长采收期青蒿中青

3、蒿素的含量。1器材1.1药材青蒿Artemisiaannual(分别采收于5～10月份的上旬和下旬，共12批)，产地：四川省泸州市。1.2仪器戴安高效液相色谱仪（P680A四元低压梯度泵，PDA100二极管阵列检测器，TCC100柱温箱，Chromeleon色谱工作站）；瑞士Precisa电子天平（XR205SM-DR）；索氏提取器。2方法与结果2.1色谱条件本实验采用的是色谱柱：DikmaKromasilC18column(5μm，250mm×4.6mm)，流动相：甲醇-0.01mol/L醋酸钠醋酸缓冲液(pH=5.8)(66∶34∶1),流速：0

4、.8ml/min,检测波长：252nm,柱温：30℃。2.2对照品溶液的制备取青蒿素对照品约10mg，精密称定，用无水乙醇溶解制成每毫升中约含1mg的溶液，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加入0.2%氢氧化钠溶液4ml，摇匀，置50℃恒温水浴中微温30min，取出，冷至室温，待液面恢复至刻度，用0.08mol/L醋酸溶液稀释至刻度，摇匀。用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液即得。2.3供试品溶液的制备取青蒿叶适量，粉碎为细粉(过30目筛)，取0.5g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚（30～60℃）40ml，回流提取4.5h，取提取液，水浴蒸干，残

5、渣用无水乙醇溶解并定容至10ml量瓶中，摇匀，精密量取1mL,置10ml量瓶中，加入0.2%氢氧化钠溶液4ml，摇匀，置50℃恒温水浴中微温30min，取出，冷至室温，用0.08mol/L醋酸溶液稀释至刻度，摇匀。用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液即得。2.4系统适应性实验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见图1～3。从图中可见，青蒿素衍生物的保留时间为6.3min左右，阴性对照在青蒿素衍生物峰处无干扰，即本试验条件下青蒿素衍生物与其它组分分离完全，与相邻色谱峰的分离度为6.78，拖尾因子

6、为：1.01，理论塔板数以青蒿素衍生物计为11353。2.5标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，15.0，20.0μl注入液相色谱仪,用上述色谱条件测定。进样量(μg)为横坐标，测得的峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，得标准曲线方程：A=34.7080C+0.3383，r＝0.9999。表明在0.0099～0.990μg之间有良好的线性关系。2.6精密度实验精密取供试品溶液10μl，按上述色谱条件连续进样5次，求得峰面积。测得RSD=0.968%,说明仪器的精密度良好。2.7稳定性实验取供试品溶液，分别在0，2，4，6

7、，8，10，12，24h精密进样10μl，结果表明供试品在24h内基本稳定。2.8重现性实验取青蒿药材粉末，按供试品溶液的制备方法，制得5份供试品溶液，分别精密进样10μl，照上述方法进行测定。RSD=0.68%，表明本方法重现性良好。2.9回收率实验取已知含量的青蒿药材粉末约0.5g，加入青蒿素标准品适量，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，测得平均回收率为98.79%，RSD=2.36%，说明本法具有良好的回收率。2.10样品测定分别精密量取对照品溶液和供试品溶液10μl，按上述色谱条件测定，并计算青蒿素的含量，结果见表1。表1不同

8、生长采收期青蒿素的含量（略）3结论青蒿素的含量8月份最高，8月前随