细菌内毒素检测技术

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1、细菌内毒素检测技术---血站应用指南天津市天大天发科技有限公司第27页目录一国家标准的要求21细菌内毒素单位：EU22细菌内毒素国家标准品：23血站常用检测品种的内毒素限值25检测细菌内毒素的设备46跟细菌内毒素检测有关的国家标准：4二细菌内毒素检查法所用试剂的基础知识51细菌内毒素51.1细菌内毒素标准品51.2细菌内毒素化学结构(LPS)：51.3细菌内毒素在水溶液中的状态：61.4细菌内毒素的耐热特性62鲎试剂（TAL）62.1细菌内毒素和鲎试剂生化反应原理：72.2鲎试剂的凝胶反应过程观测83细菌内毒素检查用水83.1药典对细菌内毒素检查用水的要求83.2细

2、菌内毒素检查用水注意事项84样本处理剂8三检测方法101各类样品的预处理及检测方法102血液保存液内毒素检测实例112.1试验器材及试剂112.2供试品资料112.3试验方法设计112.4实验过程112.5结果分析133细菌内毒素检测报告样例13四BET系列细菌内毒素分析仪介绍211生产企业技术实力雄厚，研究历史深久。212仪器发展的重大事件223仪器应用范围234性能参数235检测原理245.1光密度反应时间(t0.02)取值方法245.2反应速率测定及浓度计算方法255.3仪器直接鉴别葡聚糖存在的原理25第27页6仪器突出特色276.1更加符合药典276.2检测

3、结果更加准确276.3降低检测成本27附件全国部分用户名单27第27页一国家标准的要求1细菌内毒素单位：EU关于细菌内毒素的量值在80年代几乎都是以重量单位来表示,它很不科学，相同重量的内毒素，由于菌株来源不同，提取方法各异而且所加附形剂不同，因此其生物活性相差很大。如EC-2和EC-5，其重量换算单位分别：5EU/ng和10EU/ng，以效价单位表示内毒素的量值是十分合理的。2001年开始美日欧等国开始执行细菌内毒素检查国际统一调和案，内毒素单位统一用EU表示，各国规定的细菌内毒素检查法（包括中国）基本一致。因此EU已经成为国际公认的细菌内毒素量值，用EU表示的内

4、毒素相关论文也被世界各国所承认，而以前其他重量单位如ng，pg等已经被淘汰。2细菌内毒素国家标准品：目前国家标准品批号：981，效价：9000EU/瓶。中国药品生物制品检定所提供。3血站常用检测品种的内毒素限值品种细菌内毒素限值血液保存液(I).小于5.56EU/ml血液保存液(Ⅱ).小于5.56EU/ml红细胞保存液小于5.56EU/ml输液、输血、注射器具不超过20EU/件，与脑脊液接触和胸内应用医疗器械不超过2.15EU/件。空塑料血袋。不超过20EU/只一次性使用离心式血浆分离器，小于0.5EU/mL（浸提介质<100ml）第27页血浆管路，小于0.5EU/

5、mL（浸提介质<50ml）一次性使用机用采血器，小于0.5EU/mL（浸提介质<10ml）第27页5检测细菌内毒素的设备：《中国药典标准操作规范》2005版中收载BET系列细菌内毒素测定仪，天津市天大天发科技有限公司生产。（该系列设备在药检行业被广泛的使用）。6与细菌内毒素检测有关的国家标准：2005版《中国药典》二部收载的细菌内毒素检查法2005年版中国药典附录《细菌内毒素检查法》本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质

6、法。供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。凝胶法细菌内毒素检查用水系指含量小于0.015EU/ml灭菌注射用水。光度测定法用的细菌内毒素检查用水，其内毒素的含量应小于0.005EU/ml。试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。常

7、用的方法是在250℃干烤至少60分钟，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。若使用塑料器械，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。试验操作过程应防止微生物的污染。供试品溶液的制备某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。一般要求供试品溶液的PH值在6.0—8.0的范围内。对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的PH值，可使用酸、碱溶液或鲎试剂生产厂家推荐的适宜的缓冲液调节PH值。酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中进行配制。缓冲液必须经过验证不含内