老年黄斑变性患者abcr基因特定变异的检测

《老年黄斑变性患者abcr基因特定变异的检测》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、老年黄斑变性患者ABCR基因特定变异的检测作者：徐韶琳王英王云瑞尹元高志卓刘晔【摘要】目的评价ABCR特定的变异与老年黄斑变性(AMD)的关系。方法选取经眼底检查和荧光造影检查后临床诊断为AMD的患者50例，同时选取年龄、种族相匹配的30例作为对照。PCR选择性扩增ABCR基因的外显子21、40、42、48，应用直接测序法进行DNA序列分析。结果在48号外显子，2例(4%)AMD和1例(3%)正常对照检测到D2177N变异，差异无统计学意义(P=1.000)。21号外显子有1例AMD检测到A1038V变异，对照组未发现该变异，差异无统计学意义。另1个曾经报道检出率很高的可能与AMD有关的变异

2、G1961E(位于42号外显子)在两组均未发现。结论曾经报道的两个被认为与AMD有关的ABCR变异：D2177N和G1961E可能不是中国黄种人的主要AMD致病因素。【关键词】老年黄斑变性;ABCR基因;变异老年黄斑变性(AMD)是老年人群的主要致盲眼病，其发病与环境因素和遗传因素有关。AMD主要表现与Stargardt病十分相似，只是发病年龄不同。Stargardt病的致病基因——ABCR基因，是否与AMD的发病有关，是否是AMD的易感基因成为一个新的课题。Lel，加入抗凝剂抗凝，采用DNA分离试剂盒，按操作规程提取基因组DNA。　　1.2.2ABCR基因特定外显子的PCR扩增及序列测定　

3、　1.2.2.1引物合成根据GenBank人ABCR基因序列设计并合成引物，引物由北京奥科生物技术有限责任公司合成，引物序列:21号外显子：正向5′GTAAGATCAGCTGCTGGAAG3′，反向5′GAAGCTCTCCTGCTCCAAGC3′;40号外显子:正向5′AGGTCTGTGGGGTGAGCTG3′，反向5′TCTGGATGCCCTGAGCTGC3′;42号外显子:正向5′CCGTCTCAGTTCTCAGTCC3′，反向5′AGAGCTGATGTTCGGAAGCC3′;48号外显子:正向5′AGGCCCAACCACTAACAGAG3′，反向5′ACA

4、CTGGGTGTTCTGGACC3′。　　1.2.2.2聚合酶链反应(PCR)反应体系50μl，包括模板DNA5～10μl，4种dNTP1μl，一对引物各2.5μl，TaqDNA聚合酶1～5U，20U/μlRnase抑制剂1μl。反应在PCR扩增仪上进行，反应条件：94℃变性45s、57℃退火45s、72℃延伸75s，共35个循环，最后一次循环变性时间为60s。抽取每种扩增样品2μl用3%琼脂糖凝胶电泳验证PCR产物。见图1。　　1.2.2.3PCR产物的序列测定使用MegaBACE1000，取1μl反应产物上机测序。见图2。　　1.3统计学处理应用SPSS11.0统计软件进行χ2检验。　

5、　2结果　　2.148号外显子突变检测AMD组2例患者：AMD3、AMD41和对照组1例患者检测到6529位碱基GA的突变：D2177N。AMD3为一名74岁的男性患者，双眼黄斑区周围大量玻璃膜疣;视力：OD：0.2，OS：0.3(图3)。AMD41为一名69岁的女性患者，双眼黄斑区可见玻璃膜疣，右眼见1.5PD范围内的渗出和出血，黄斑囊样变性;左眼PRE萎缩;视力OD：0.1，OS：0.4。对照组发现该突变的为一名66岁的女性，双眼黄斑区无任何病变;视力：OD：1.0，OS：1.0。但两组比较差异不显著(P=1.0000,OR=1.208,95%可信区间：0.1048～13.932)。　

6、　2.221号外显子突变检测AMD组1例患者AMD35检测到3113位碱基CT的突变：A1038V，为一名59岁的男性患者，双眼黄斑区可见玻璃膜疣，左眼显著;左眼黄斑区RPE萎缩;黄斑中心凹反射消失;右眼黄斑中心凹反射隐约可见，RPE萎缩。视力：OD：0.4，OS：0.4。对照组没有发现该外显子突变。两组比较差异不显著(P=1.0000,OR=1.848,95%可信区间：0.0729～46.872)。曾经报道过的21号外显子的变异体E1036A，即在3106位的GA的突变均未检出。　　2.340、42号外显子突变检测两组中40和42号外显子均未发现任何突变。曾经报道的40号外显子的变异体

7、E1885K,即5653位的GA突变和变异R1898H，即5693位的GA突变在本试验中均未检出。42号外显子的G1961E即5882位的GA突变，在AMD组和对照组也均未检出。　　3讨论　　ABCR最初发现于20世纪70年代，是感光细胞外节盘沿蛋白(diskrim)的重要组成部分，被称为rim蛋白。Allikmets〔3〕于1997年发现了与视网膜有关的特异性ABC转运基因，并将它称为ABCR，并且发