氯诺昔康对手术致痛大鼠脊髓fos蛋白表达的影响

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1、氯诺昔康对手术致痛大鼠脊髓Fos蛋白表达的影响【关键词】疼痛；氯诺昔康；脊髓；原癌基因蛋白质cfos；免疫组织化学；疾病模型,动物；消炎药,非甾类　　非甾体类抗炎药氯诺昔康已越来越多用于临床术后镇痛[1]。本文拟研究氯诺昔康对手术致痛大鼠脊髓Fos蛋白表达的影响,评价氯诺昔康对手术致痛的镇痛作用。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1动物与分组健康成年雄性SD大鼠[福建医科大学实验动物中心提供，许可证号:SCXK(闽)20040002)]50只,体质量280～320g,随机分为7组：注射用水组（L）、L组（腹腔注射氯诺昔康3mg/kg）、S组（手术致痛未预注氯诺昔康）为

2、对照组,每组6只；L1S组、L2S组、L3S组、L4S组为实验组,每组8只,于手术致痛前20min分别腹腔预注射氯诺昔康0.33,1,3,9mg/kg。　　1.1.2试剂一抗兔抗cFos(4):sc52,免疫组织化学染色试剂盒为PV9000（北京中杉生物公司）。　　1.2方法　　1.2.1疼痛模型制作手术致痛参照文献[2],从足底近端0.5cm处向趾部作一约1cm的切口,挑起足底肌肉并纵向切割后缝合皮肤。　　1.2.2脊髓片制备及免疫组织化学分析手术致痛3h后,3%戊巴比妥钠60mg/kg麻醉下迅速开胸显露心脏,经左心室灌注预冷的4%多聚甲醛固定,打开椎板,取脊髓L4～L5节

3、断,位置相当于腰膨大中下段。将所取标本置于甲醛固定液中固定,经处理后石蜡包埋切片,切片经抗原修复、封闭非特异抗原、一抗兔抗Fos血清（1∶200）、二抗羊抗兔IgG血清及DAB呈色处理后,在光学显微镜下观察,计数Fos免疫反应阳性神经元（Foslikeimmunoreactivityneurons,FLIN）。每次实验均留取数片用PBS或正常羊血清代替一抗做对照实验。　　1.2.3结果判定免疫组织化学标记显示：FLIN呈圆形或者卵圆形,细胞核呈棕黄色。每只大鼠随机取切片8张,计数每张切片脊髓背角浅层（Ⅰ～Ⅱ层）的FLIN数目,其均数为平均FLIN数目。　　1.3统计学处理计量数

4、据均以x±s表示,采用SPSS11.0进行统计分析，组间比较用方差分析,两两比较用Duntt检验,P<0.05为差别有统计学意义。　　2结果　　W组和L组未行手术致痛,FLIN极少,2组比较差别无统计学意义（P＞0.05）。S组经过手术致痛,未用氯诺昔康镇痛药,在脊髓L4～L5节断灰质出现大量FLIN,多集中在手术侧脊髓,最多分布在脊髓背角浅层（Ⅰ～Ⅱ层）,其次在深层（Ⅴ～Ⅵ层）,固有核和腹侧灰质也有少量FLIN。L1S组、L2S组、L3S组及L4S组大鼠脊髓灰质背角浅层FLIN数目随氯诺昔康剂量的增大呈减少趋势,且同S组比较差别有统计学意义（P<0.05）（表1，

5、图1）。　　3讨论　　3.1疼痛与脊髓cfos的表达自Brennan等提出大鼠切口疼痛模型后[2],文献报道大鼠切口疼痛可使脊髓背角即刻早期基因cfos原癌基因表达,其产物为Fos蛋白[3]。cfos原癌基因的表达可作为伤害性刺激的标志物。一定程度上,cfos被诱导的数量与所受刺激的强度时间及性质而异[4]。　　脊髓背角浅层（Ⅰ～Ⅱ层）的Fos蛋白表达是支配大鼠后爪的C类传入神经纤维兴奋所致,深层（Ⅴ～Ⅵ层）的Fos蛋白表达是由于浅层输入会聚结果,而Ⅲ、Ⅳ层主要是由那些仅对非伤害性刺激做了反应的神经细胞构成。它们的分布与传递外周伤害性信息的初级传入纤维终末的终止部位相一致

6、,也与背角痛敏神经元的分布部位相重叠,表明脊髓背角Fos阳性神经元大都是感觉传递通路上的二级或中间神经元。因此FLIN主要集中在脊髓背角Ⅰ～Ⅱ层,其次为Ⅴ～Ⅵ层,而Ⅲ～Ⅳ层却很少。　　A:注射用水组;B:氯诺昔康组;C:手术致痛组;D:氯诺昔康0.33mg/kg;E:氯诺昔康1mg/kg;F:氯诺昔康3mg/kg;G:氯诺昔康9mg/kg.A，B:基本无Fos表达;C:可见较多Fos表达;D，E，F，G:随氯诺昔康增加Fos表达减少.　　图1脊髓灰质背角浅层Fos表达情况(×40)（略）　　Fig1TheexpressionofFosindorsalhornofspinalcor

7、d　　3.2镇痛药减少疼痛引起的脊髓cfos表达Honore等研究发现创伤后3hFLIN最多[5]。本研究中L组仅行手术致痛，未用镇痛药,与其它组相比,脊髓背角浅层FLIN数目最多,与以上研究结果相似。已有研究显示,预先给予镇痛药吗啡、曲马多等可显著减少各种伤害性刺激所致的脊髓cFos表达,如机械性损伤、足底注射甲醛等[34]。　　既往非甾体类抗炎药较少用于术后疼痛,而近年来研制出的新型非甾体类抗炎药如氯诺昔康等已在临床上越来越多用于术后镇痛,其机制主要是通过作用于环氧化酶