超高效液相色谱

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1、超高效液相色谱table/090704.pdf）。2.2色谱条件RM）模式检测，16种染料的质谱分析参数见表1，MRM色谱图见图1。表116种致癌和致敏染料的质谱分析参数（略）Table1MSparametersfor16carcinogenicandallergenousdyestuffsanalysis图116种致癌和致敏染料的MRM色谱图（略）Fig.1MRMchromatogramsof16carcinogenicandallergenousdyestuffs色谱峰编号同表1（ThepeaknumbersarethesameasinTable

2、1）.2.4标准储备液和工作液的配制准确称取适量的各染料标准品，用甲醇溶解并定容至100mL，配制成1000mg/L标准储备液，于－20℃下保存。准确量取各染料标准储备液5mL，用甲醇定容至100mL，配制成50mg/L混合标准储备液。使用时，用甲醇逐级稀释成混合标准工作液，于4℃下保存，现用现配。2.5样品处理2.5.1纺织品、皮革、纸张、木材、气球、造型黏土、贴纸材质玩具材料的处理取代表性样品，测试试样应从单个样品上的可触及部分移取，同种材料可合并作为同一测试试样，将其剪碎至3mm×3mm以下，混匀。准确称取1.0g试样置于50mL具塞锥形瓶中，

3、准确加入15mL无水乙醇，超声提取15min。将提取液转移至50mL鸡心瓶中，残渣再加入15mL无水乙醇提取一次。合并提取液，用旋转蒸发仪于40℃水浴减压浓缩至近干，用氮气缓慢吹干后，准确加入1mL甲醇溶解残渣，过0.20μm微孔滤膜后，供UPLC/MS/MS测定。2.5.2可接触液体玩具材料的处理取代表性样品，测试试样应从单个样品上的可触及部分移取，同种材料可合并作为同一测试试样。准确称取1.0g试样置于50mL具塞锥形瓶中，准确加入15mL无水乙醇，超声提取15min，将提取液转移至50mL鸡心瓶中，用旋转蒸发仪于40℃水浴减压浓缩至近干，用氮气

4、缓慢吹干后，准确加入1mL甲醇溶解残渣，过0.20μm微孔滤膜后，供UPLC/MS/MS测定。3结果与讨论3.1样品处理方法的优化酸性红26等16种染料的正辛醇/水分配系数（Koin）和提取次数（1，2和3次）的提取效果，确定了最佳的样品处理条件。3.2色谱条件的优化3.2.1色谱柱的选择采用亚微米小颗粒填料色谱柱可获得更高的分离度、样品通量和灵敏度。分别考察了具有不同选择性的UPLC色谱柱（规格均为50mm×2.1mm，1.7μm）对16种染料的分离效果：C18及C8（直链烷烃）、ShieldRP18（内嵌有氨基甲酸酯极性基团）、Phenyl（苯基

5、连接在C6直链的硅甲基官能团上）、HILIC（硅胶基质）、HSST3（三键C18烷基键合）。结果表明，16种染料在ACQUITYUPLCBEHC18色谱柱上获得了最为理想的分离效果。3.2.2流动相的选择分别考察了反相色谱常用的有机相溶剂（甲醇和乙腈）与不同种类和pH值的挥发性缓冲液组成的流动相体系，如甲醇（或乙腈）-5mmol/L甲酸铵溶液（pH值分别调节为3.75，4.00，4.25，4.50，4.75，5.00，5.25，5.50和5.75）、甲醇（或乙腈）-5mmol/L乙酸铵（pH值分别调节为2.75，3.00，3.25，3.50，3.75

6、，4.00，4.25，4.50和4.75）、甲醇（或乙腈）-0.1%甲酸溶液等对染料化合物的色谱行为和离子化程度的影响。结果表明，以乙腈-5mmol/L乙酸铵溶液（pH=5.0）作为流动相时获得了最优的色谱峰形、分离效果和质谱信号响应。进一步比较了乙酸铵缓冲液离子强度的影响，乙酸铵溶液浓度从2mmol/L变化到10mmol/L的结果表明，5mmol/L乙酸铵为最佳添加量。由于上述16种染料包括酸性染料、碱性染料、分散染料、直接染料等类别，化学结构上涵盖了偶氮型、三芳甲烷型、蒽醌型、杂环型等，各染料的化学性质和保留性质相差较大，选择梯度洗脱方式，通过优

7、化流动相梯度洗脱条件实现了16种染料的有效分离。3.3质谱条件的优化在ESI+和ESI－离子化模式下，分别进行全扫描以选择适当的电离方式和准分子离子峰。实验结果表明，大部分染料在离子源ESI+电离方式下，可获得较高丰度的〖M+H〗+母离子。酸性红26、酸性紫49等含钠染料的母离子为〖(M－nNa)+(n+1)H〗+，碱性红9、碱性紫1、碱性紫3等含氯染料的母离子为〖M－Cl+H〗+，16种染料的二级质谱图见附图1（fig/090704.pdf）。在确定各染料的母离子后，采用子离子扫描方式进行二级质谱分析，对子离子进行了优化选择，确定定量离子

8、和辅助定性离子，通过优化毛细管电压、一级锥孔电压、二级锥孔电压、射频透镜电压、碰撞能量、质谱分辨率等质谱参数