微生物自动鉴定及药敏系统的研究进展

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1、微生物自动鉴定及药敏系统的研究进展一、细菌自动鉴定及药敏系统的发展史细菌的鉴定是细菌分类的实验过程，长期以来，临床微生物实验室一直沿用100多年前由Gram、Pasteur、Koch、Petri等创造的传统的微生物学鉴定方法。这些传统的鉴定方法不仅过程烦琐，费时费力，且在方法学和结果的判定、解释等方面易发生主观片面而引起的错误，难以进行质量控制。20世纪60年代以后，微生物学家和工程技术人员密切合作，对微生物的研究采用了物理的、化学的分析方法，发明了许多自动化仪器，并根据细菌不同的生物学性状和代谢产物的差异，逐步发展

2、了微量快速培养基和微量生化反应系统，使原来缓慢、烦琐的手工操作变得快速、简单，并实现了自动化和机械化。微生物鉴定自动化方法，包括(1)临床微生物鉴定系统；(2)气液色谙分析；鉴定厌氧菌和分枝杆菌多用于研究；(3)核酸杂交；多用于研究；(4)化学发光技术；可鉴定一些细菌少数分枝杆菌属和一些真菌。80到90年代发展迅速，并广泛用于临床。1985年第一台自动化细菌分析仪器Vitek-AMS进入中国并成功使用。1999年底法国梅里埃公司推出VITEK2系统，从接种物稀释、密度计比较及卡冲填和封卡等步骤均实现了全自动化。目前已

3、有多种微生物自动鉴定及药敏测试系统问世，如VITEK-AutoMicrobicSystem(AMS)、PHOENIXTM、MicroScan、Sensititre、ABBott(MS-2System)、AUTOBACIDXSys-tern等。这地自动化系统具有先进的微机系统，广泛的鉴定功能，适用于临床微生物实验室、卫生防疫和商检系统，主要功能包括细菌鉴定、细菌药物敏感性试验及最低抑菌浓度(MIC)的测定等。其准确性和可靠性均已大大提高。二、细菌自动鉴定及药敏系统原理及性能比较1.原理：临床微生物鉴定系统使细菌鉴定过程

4、规范化和程序化，将细菌对底物的生化类型与已建立数据库类型相比较。测试原理主要是利用物质产生PH值变化，能释放色源或荧光源复合物的酶学反应，四氮唑标记碳水化合物代谢活性的产生，挥发或非挥发酸产生，或可见生长。鉴定系统反应原理系统反应需要生长分析阳性结果显示系统例子PH基础反应（多为15-24小时）是碳源利用PH指示剂颜色变化；利用碳源源产生酸，利用氮源产碱APICrystalVITEKMicroScan酶谱（多为2-4小时）否微生物已有的酶当无色复合物被适当酶水解时，色源/荧光源释放引起颜色变化MicroScanIDS

5、（Remel）碳源利用是有机产物因转移电子至无色四唑氮标记碳源使染料变为紫色Biolog挥发的或非挥发的酸检测是细胞脂肪酸以检测代谢产物为基础的层析技术，与数据库中的资料相比较MIDL生长可见检测是不同底物微生物利用某一底物产生浊度酵母校菌2．采有上述原理的各种鉴定系统可鉴定肠杆菌科，菌。目前较完善的鉴定系统性能比较。非发酵菌，革兰阳性球菌，革兰阴性球菌，厌氧菌和酵母自动鉴定系统性能比较性能VitekAutoSCAN-4Walk/AwaySenititre无限60polor系统容量32/60/120无限40/9692

6、  无限数据库中可鉴定菌种数    566480 需氧革兰阴性杆菌（GN）11611213914724624078需氧革兰阳性杆菌504949否否815否厌氧菌否5854否否50否苛氧菌否2120否 194否酵母菌364042否GN中孵育否28否分枝杆菌否否否否手工自动否接种自动手工手工自动分开联机自动孵育联机分开联机联机4或16h30min分开需氧革兰阴性杆菌2-18h24或48h2或15-42h5或18h4或16h30min18-24h需氧革兰阳性球菌2-15h24或48h2或15-42h  30min 厌氧菌否

7、4h4h  30min 酵母菌24或48h4h   30min 分枝杆菌否  否否否 手工加试剂否是否室温4室温是贮存温度（℃）4室温，4室温，4   室温其它性能   是否否 药敏试验是是是否否否是尿筛检/鉴定是否否是是是是DMS是是是   是计算机界面是是是BiologyMISAutoSce  三、常见细菌自动鉴定及药敏系统工作原理（一）半自动微生物鉴定和药敏系统1．VITEK-ATBATB鉴定系统是将肉眼观察的结果输入电脑，计算机数据库由许多细菌条目(taxa)组成，将输入结果与数据库内细菌条目比较，自动地得到

8、鉴定结果。ATB敏感性试验采用半固体琼脂培养丛，不同的药敏试条含有不同种类的抗生素，每种抗生素都设有两个关键性的浓度，在24小时内通过观察有(+)无(一)细菌生长以判断药敏试验结果。结果可直接判读为：敏感，中介或耐药。由读数仪和电脑两部分组成。系统是由API金标准改良而成，拥有庞大的细菌资料库以及严格的质控，可鉴定多达550种细菌。另外，ATB