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1、灰树花子实体多糖中陈国广，孟蕾，孔毅，杨婉，吴梧桐【关键词】灰树花；,,多糖,β-葡聚糖；,,,酶 摘要：目的探讨灰树花子实体多糖中β葡聚糖含量的测定方法。方法多糖粗提物依次用高温α淀粉酶、木瓜蛋白酶和α1，4葡萄糖水解酶水解，通过测定其中葡萄糖的含量计算β葡聚糖的含量。结果确定了测定方法中几种酶的用量。在0~300mg・L-1范围内线性关系良好，测得灰树花子实体多糖中β葡聚糖含量为3.26%~3.51%，3组样品的平均回收率为90.5%。结论该方法操作简便，准确度高。 关键词：灰树花；多糖β-葡聚糖；酶 Enzy
2、maticMeasurementofβglucansinPolysaccharidesofGrifolafrondosa Abstract：ObjectiveAnenzymaticmethodforanalysisofβglucaninpolysaccharidesofGrifolafrondosahasbeenstudied.MethodsAfterhydrolyzingbythermostableαamylose,papainandamyloglucosidase,thevalueofglucoseeasureda
3、ndthecontentofβglucanesinedandthecontentofβglucaninthesamplesaticmethodissimpleande 灰树花（GrifolaFrondosa）是一种药食兼用的珍贵大型真菌，其子实体中富含氨基酸、多糖以及微量元素等在内的多种营养成分〔1〕。日本学者通过对灰树花发酵。近20年的研究发现,灰树花中含有的活性多糖具有明显的抗HIV(艾滋病病毒)、抗肿瘤，改善免疫系统功能及调节血糖、血脂及胆固醇水平、降血压等作用〔2,3〕，且未发现有毒副作用。研究表明灰树花多糖的
4、免疫活性与其中β-葡聚糖有密切的关系，因此β-葡聚糖的含量成为衡量灰树花多糖活性的重要指标之一。本文对灰树花子实体多糖中的β-葡聚糖的含量的测定方法进行了研究，以期为进一步研究其与灰树花多糖的活性之间的关系奠定基础。 1仪器与试剂 1.1原料灰树花多糖粗提物，浙江方格药业有限公司。 1.2仪器HH-2数显恒温水浴锅，SorvallSuperT21冷冻高速离心机，751型紫外分光光度计。 1.3试剂高温α淀粉酶20000U・ml-1，宜兴市生物工程公司，木瓜蛋白酶19.2U・ml-1，yloglucosidase(
5、α1,4-葡萄糖水解酶)73.8U・ml-1，Sigma公司。葡萄糖测定试剂盒，上海荣盛生物技术有限公司。 2方法与结果 2.1方法 2.1.1高温α淀粉酶用量的确定准确称取1.0g灰树花多糖粗提物6份，分别溶于40mlpH6.0的磷酸缓冲液中，振荡使其溶解，向其中加入一定量的高温α淀粉酶，放入100℃水浴中反应30min，冷却至室温。离心（8000r・min-1,10min），取上清液，加入4倍体积的95%乙醇。离心（8000r・min-1,10min），沉淀用蒸馏水定容至300ml，即得样品溶液。吸取样品溶液0
6、.1ml，各以水补至1.0ml，用蒽酮硫酸法于620nm测吸光度值。结果见图1。由图1可知,当高温α淀粉酶的用量达到3000U・g-1(多糖粗提物)后,再增加酶的用量，620nm测得的吸光度值变化不大。因此,确定高温α淀粉酶的用量为3000U・g-1(多糖粗提物)。 图1高温α淀粉酶的用量对水解效果的影响(略) 2.1.2木瓜蛋白酶用量的确定准确称取1.0g灰树花多糖粗提物6份，分别溶于40mlpH6.0的磷酸缓冲液中，振荡使其溶解，并调节pH值到7.5，依次称取一定量的木瓜酶，以磷酸缓冲液溶解，与已进行过第一步酶解
7、后的多糖溶液充分混匀后置于60℃水浴锅中加热30min，冷却至室温。离心（8000r/min,10min），取上层清液，加入4倍体积的95%乙醇。离心（8000r/min,10min），沉淀用蒸馏水定容至400ml，即得样品溶液。吸取样品溶液液0.1ml，各以水补至1.0ml，于280nm测定其吸光度值。结果见图2。从图2可以看出，当木瓜蛋白酶的用量为49U・g-1(多糖粗提物)时280nm测定其吸收值最低，再增加酶的用量，紫外吸收又随之增加，因此确定木瓜蛋白酶的用量为49U・g-1(多糖粗提物)。 2.1.3α1,4
8、葡萄糖水解酶用量的确定准确称取1.0g灰树花多糖粗提物6份，分别溶于40ml磷酸缓冲液中，振荡使其溶解。分别量取最适用量的α淀粉酶和木瓜蛋白酶，按2.1和2.2项下的方法依次酶解。将酶解液的pH调至4.3，依次称取一定量的Amyloglucosidase，以磷酸缓冲液溶解。加入酶解液充分混匀后置于60℃水浴锅中加热3
