基因工程genetic engineering

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1、1.基因工程geneticengineering：在分子水平上，提取（或合成）不同生物的遗传物质，在体外切割，再和一定的载体拼接重组，然后把重组的DNA分子引入细胞或生物体内，使这种外源DNA（基因）在受体细胞中进行复制与表达，按人们的需要繁殖扩增基因或生产不同的产物或定向地创造生物的新性状，并能稳定地传给下代。2.Northernblotting：指的是将电泳凝胶中的RNA转移到叠氮化的或其他化学修饰的化学滤膜上，通过工价交联作用而使它们永久结合在一起的方法。3.载体Vehicle：携带目的基因进入宿主细胞进行扩增和表达的工具称为载体。4.T-DNA：农杆菌Ti或Ri质粒中的

2、一段DNA序列,可以从农杆菌中转移并稳定整合到植物核基因组中,已成为植物分子生物学中广泛应用的遗传转化载体5.定点诱变：特异性地改变一段克隆DNA序列中的任何碱基，叫定点诱变。6.限制性核酸内切酶：酶因能阻止外源DNA的入侵，能切割降解噬菌体DNA而限制外源DNA。7.Western blotting：使蛋白质的电泳条带从聚丙烯酰胺凝胶中转移到硝酸纤维素膜或是尼龙膜上，然后紧密结合的方法8.DNA连接酶：用限制性内切核酸酶切割不同来源的DNA分子，再重组则需要用另一种酶来完成这些杂合分子的链接和封合。9.盒式诱变：用人工合成的具有多种突变的双链寡核苷酸片段替换靶DNA的对应片段

3、。10.cDNA文库cDNAlibrary:将生物某一组织细胞中的总mRNA分离出来作为模板，在体外用反转录酶合成互补的双链cDNA，然后接到合适的载体上，转入到宿主细胞后形成的所有克隆叫cDNA文库。11.发育可塑性：通过将组织外植体、愈伤组织、细胞悬浮液或原生质体置于适当的培养基上使完整的可育植株再生12.结合Conjugation指两个细菌之间的杂交，部分染色体从一个细胞转入另一个细胞13.回文序列：顺看反看都一样的序列。14.粘性末端cohesiveends：当一种限制性内切酶在一个特异性的碱基序列处切断DNA时，就可在切口处留下几个未配对的核苷酸15.平末端Blunt

4、 ends：当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。16.同裂酶isoschizomers：有一些来源不同的限制酶识别的是同样的核苷酸靶子序列。17.同尾酶Isocaudiners：一类识别DNA分子中不同核苷酸序列，但能酶切产生相同黏性末端的限制性内切酶。18.柯斯质粒cosmid：是另外一种以入(叫landa)噬菌体为基础专门为克隆大片段而设计并和质粒共同构建的杂合载体。19.YAC（酵母人工染色体）：能在酵母菌中繁殖、可携带长达1Mb的外源DNA的克隆载体。20.BAC（细菌人工染色体）：由大肠杆菌单拷贝F质粒衍生而

5、成的，可用于克隆基因组大片段DNA及构建基因组文库的克隆载体。1、cDNA文库有什么特点。如何利用λ噬菌体构建cDNA文库?（15分）(1)总RNA的提取(2)mRNA的分离(3)mRNA的纯化(4)cDNA第一条链的合成①随机引物法；②oligo-dT(12-18)引物法;(5)cDNA第二条链的合成(6)cDNA的甲基化和接头的加入(7)cDNA同载体的连接(8)噬菌体蛋白的体外包装(9)噬菌斑原位杂交分离基因2、用叶盘法将克隆好的抗除草剂的双载体体系转化植株，获得抗除草剂的植物。请设计实验步骤。Ifyouhaveclonedtheherbicideresistinggen

6、eandonlyhavebinaryvectorsinyourlab,pleasedesignanexperimentalproceduretoproduceaplantbearingherbicideresistingabilityusingtheleaf-disctransformationmethod.（15分）[1]通过电穿孔或“大肠杆菌与根瘤农杆菌接合，使除草剂抗性基因中间表达载体转化根瘤农杆菌。并经卡那霉素筛选和PCR鉴定阳性菌株。[2]在叶片上打孔得到小叶盘（直径几毫米），并将其表面消毒[3] 小叶盘与携带重组T-DNA的根瘤农杆菌液体共培养过夜。[4] 小叶盘干

7、燥后，转移到固体培养基培养2天。OrinEnglish3、PCR技术的原理及技术特点？（15分）原理：首先是双链DNA分子临近沸点的温度下加热时便会分离成两条单链的DNA分子，（2分）然后DNA聚合酶（1分）以单链DNA为模板（1分）并利用反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸（dNTP）（1分）合成新生的DNA互补链。此外，DNA聚合酶同样需要有一小段双链DNA来启动“引导”新链的合成。因此，新合成的DNA链的起点，事实上是由加入的反应混合物中的一对寡核苷酸引物（1分）在模板DNA链两端的退火位