饲料防霉剂防霉效果判定的三种便捷的方法

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1、7饲料防霉剂防霉效果判定的三种便捷的方法韩康印，欧阳亮，黄海珊韩康印，上海邦成生物科技有限公司，201615，上海市嘉蓬路177号。欧阳亮，黄海珊单位及通讯地址同第一作者摘要：本文介绍了平皿抑菌计数法、最低抑菌浓度法、杯碟法三种检测防霉剂防霉效果的方法，并选择丙酸钙和双丙酸铵作为实验材料，通过将其添加到培养基中来抑制米曲霉的生长。通过最低抑菌浓度法的实验，我们测定了丙酸钙和双丙酸铵对米曲霉的最低抑菌浓度，此外，通过将最低抑菌浓度法与平皿抑菌计数法、杯碟法的实验结果相比较，结果我们发现这三种方法在测

2、定丙酸钙和双丙酸铵对米曲霉的抑制效果上，结果是一致的。本文中介绍的三种方法，实验周期短，可用于防霉剂样品的初步筛选。关键词：防霉剂防霉效果最低抑菌浓度引言中国是农业大国，也是人口大国，随着养殖行业的规模化，饲料的生产也呈现规模化，但是饲料在生产、存储、运输过程中常常被霉菌感染，霉菌主要通过分解饲料中的蛋白质、糖类和脂肪等造成饲料营养价值和适口性的下降[3]，对养殖的家禽健康照成严重的危害。据估计，全世界每年有25%的粮食和饲料被霉菌污染，造成巨大的损失。如何预防和减少霉变，目前防霉的方法有物理防霉

3、法和化学防霉法，根据目前饲料生产的成本控制、包装、储存等实际情况，添加化学防霉剂是一种较经济、实用、有效的办法。由于饲料防霉剂关系到饲料生产和安全使用，也会影响到食品安全，选择合适的防霉剂意义重大。由于目前市面上的防霉剂种类繁多，价格差异较大。如有机酸中乙酸、丙酸、苯甲酸等；有机酸盐类中有丙酸钙、苯甲酸钠等，还有富马酸二甲酯、丙酸和其他有酸复配及丙酸和丙酸钙复配产品类[2]。据调查，部分饲料厂为了提高产品水分选择防霉剂品种中价格最高的或者进口品牌，而部分厂家则会选择价格低廉的以节约成本，这在一定程

4、度上反映了各饲料厂在选择防霉剂上的盲目性[1]。目前用于饲料防霉剂防霉效果的检测方法较多，主要有平皿抑菌计数法、杯碟法、最低抑菌浓度法、二氧化碳释放法、温度测定法、饲料常规试验、饲料破坏试验[6]等，本文选择平皿抑菌计数法、最低抑菌浓度法、杯碟法3种方法对市场上常用的多种防霉剂进行检测并加以比较，旨在为饲料厂筛选防霉剂样品时提供参考。1实验材料与方法71.1实验材料防霉剂原料样品：丙酸钙和双丙酸铵；实验菌种：供试菌种来源于发霉饲料中分离纯化的米曲霉。霉菌孢子液的制备[5]：将斜面保存的米曲霉接种到

5、PDA固体培养基的斜面上，30℃培养3天。在无菌条件下用10ml无菌水将PDA斜面培养基上的霉菌孢子洗脱，制成霉菌孢子悬液。PDA培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15—20g，水1000ml，pH自然，马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补足水至1000ml，121℃灭菌30min。查氏培养基：NaNO32g，K2HPO41g，KCl0.5g，MgSO40.5g，FeSO40.01g，蔗糖30g，琼脂15—20g，水1000ml，pH自然，121℃灭菌2

6、0min。1.2实验器材全温振荡培养箱：型号HZP-250，上海精宏实验设备有限公司生化培养箱：型号SHP-300，上海三发科学仪器有限公司立式压力蒸汽灭菌器：型号YXQ-LS-500II，上海博迅实业有限公司医疗设备厂电子天平：型号JA1003，上海瞬宇恒平科学仪器有限公司移液枪：100—1000ul培养皿牛津杯：不锈钢管，外径（7.8±0.1mm），内径（6.0±0.1mm），高度（10±0.1mm）抑菌圈自动测量分析仪或游标卡尺（精确到0.1mm）1.3实验方法1.3.1平皿抑菌计数法[4]

7、本法根据霉菌生理特性和防霉剂防霉原理，选择适宜霉菌生长而不适宜细菌生长的高盐查氏培养基，灭菌后趁热倾注20ml培养基至培养皿内，待培养基凝固后。将菌液稀释至每毫升含霉菌约100个，将稀释后的霉菌菌液与0.08g/ml的防霉剂样品液按1:1混合后，取1ml混合液至固体培养基中间，均匀涂布，使防霉剂相对于培养基的浓度为0.2%，待干后，将培养皿翻转，置于霉菌培养箱内，在28℃下培养观察霉菌菌落总数。以同体积的无菌水代替防霉剂样品液与霉菌菌液混合的混合液作为空白对照。每组设置三个平行，28℃培养两天。分

8、别以0.10g/ml、0.12g/ml的防霉剂样品代替0.08g/7ml防霉剂样品做重复实验，使防霉剂相对于培养基的浓度为0.25%、0.3%。表一固体培养基中防霉剂样品添加量样品0.08g/ml丙酸钙0.08g/ml双丙酸铵0.1g/ml丙酸钙0.1g/ml双丙酸铵0.1g/ml丙酸钙0.12g/ml双丙酸铵丙酸钙0.2%1ml00000双丙酸铵0.2%01ml0000丙酸钙0.25%001ml000双丙酸铵0.25%0001ml00丙酸钙0.3%00001ml0双丙酸铵0.3%