妇舒片质量标准的研究_15

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妇舒片质量标准的研究作者：李嘉，黄建猷，邓治旭，龙杰超，甄汉深【关键词】妇舒片；,,大黄素；,,大黄酚；,,薄层色谱法；,,高效液相色谱法摘要：目的建立妇舒片的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别妇舒片中的大黄、牡丹皮、乌药；并采用高效液相色谱法测定该药中大黄素、大黄酚的含量。结果在薄层色谱中可检测出大黄、牡丹皮、乌药，大黄素在~μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=，平均加样回收率为%，RSD=%(n=6)；大黄酚在~540.μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=，平均加样回收率为%，RSD=%(n=6)。结论所建立的方法简便易行，重现性好，可有效地控制该制剂的质量。关键词：妇舒片；大黄素；大黄酚；薄层色谱法；高效液相色谱法StudyonQualityStandardforFushuTabletAbstract：ObjectiveToestablishthequalitystandardofFushuetRhizomaRhEi,CortexMoutan,RadixLinderaeinFushuTabletwereidentifiedbyTLC.ThecontentofemodinandchrysophanolinFushuTabletwasdeterminedbyetRhizomaRhEI,CortexMoutan,RadixLinderaecouldbedetectedbyshowedagoodlinear relationshipatrange~μg,r=,theaveragerecoveryrate%,RSD=%(n=6).Chrysophanolshowedagoodlinearrelationshipatarangeof~540.μg,r=,theaveragerecovery%,RSD=%(n=6).ConclusionTheestablishedmethodissimple,feasibleandreproducible.ThisstudyprovidesamethodforthequalitycontrolofFushuTablet.Keywords：FushuTablet;Emodin;Chrysophanol;TLC；HPLC　　妇舒片是新研制的中药新药，由大黄、牡丹皮、乌药等中药组成，具有清热解毒，行气化淤，除湿止带之功效，用于治疗妇女湿热所致的带下、痛经。为了有效控制该药品质量，本文采用薄层色谱法对方中大黄、牡丹皮、乌药进行定性鉴别，并采用HPLC测定方中大黄的有效成分大黄素和大黄酚。　　1仪器与试药日本岛津LC10A高效液相色谱仪，UV10A紫外检测器；威玛龙色谱工作站；HPLC流动相所用甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余所用试剂均为分析纯；大黄素、大黄酚、芍药苷对照品、乌药对照药材由中国药品生物制品检定所提供；妇舒片及各被检药材的阴性制剂均为自制。 　　2方法与结果.1薄层鉴别.大黄的鉴别取本品10片，除去包衣，研细，加甲醇20ml浸泡1h，滤过，取滤液ml，蒸干，加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，加热回流30min，立即冷却，用乙醚分2次振摇提取，20ml/次，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。取缺大黄的阴性制剂10片，同法制成阴性对照溶液。另取大黄对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取大黄素、大黄酚对照品，加氯仿制成每毫升中各含的混合溶液，作为对照品溶液。吸取上述四种溶液各μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚甲酸乙酯甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色，而阴性无干扰。结果见图1。.牡丹皮的鉴别取本品12片，除去包衣，研细，置索氏提取器中，加石油醚40ml，加热回流1h，弃去石油醚液，药渣挥干溶剂，加甲醇50ml，加热回流h，滤过，滤液回收甲醇至干，残渣加水20 ml使溶解，移置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，20ml/次，正丁醇蒸干，残渣用适量水溶解后，通过聚酰胺柱，用水50ml洗脱，洗脱液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取缺牡丹皮的阴性制剂12片，同法制成阴性对照溶液。另取牡丹皮对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取芍药苷对照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述四种溶液各μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性无干扰。结果见图2。.乌药的鉴别取(鉴别)(1)项下乙醚液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。取缺乌药的阴性制剂10片，同法制成阴性对照溶液。另取乌药对照药材1g，同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚甲酸乙酯甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而阴性无干扰。结果见图3。.2含量测定.色谱条件与系统适应性实验色谱柱：LichrospherC18(250mm×，μm)；流动相：甲醇%磷酸溶液；流速： ml/min；柱温：室温；检测波长：25nm，进样量10μl。.对照品溶液的制备分别精密称取大黄素及大黄酚对照品适量，加甲醇制成每毫升含大黄素1μg，大黄酚3μg的混合溶液。1.大黄素、大黄酚对照品2.大黄对照药材3.妇舒片样品4.阴性对照图1大黄的薄层色谱图1.芍药苷对照品2.牡丹皮对照药材3.妇舒片样品4.阴性对照图2牡丹皮的薄层色谱图1.乌药对照药材2.妇舒片样品3.阴性对照图3乌药的薄层色谱图　　供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取，置2ml容量瓶中，加甲醇约20ml，超声处理1h，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过。精密量取续滤液ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，残渣加稀盐酸10ml，超声处理min，再加氯仿20ml，加热回流1h，立即冷却，移至分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取3次，每次约10ml，合并氯仿液并移至100ml锥形瓶中，挥去氯仿，残渣精密加入甲醇10 ml，称定重量，置水浴中微热溶解残渣，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜滤过，取滤液，作为供试品溶液。.4阴性对照溶液的制备按处方比例称取除大黄以外的其他药材，按处方制法制备缺大黄的阴性样品。按项下方法制成阴性对照溶液。.5测定方法分别精密吸取上述3种溶液各10μl，注入液相色谱仪，在上述色谱条件下测定，结果表明供试品有与大黄素、大黄酚对照品相同保留时间的色谱峰，与其他组分离良好，大黄素峰和大黄酚峰保留时间分别为和，阴性对照溶液在大黄素、大黄酚出峰时间没有任何杂质峰。色谱图见图4。.6方法学考察.线性关系考察精密称取大黄素对照品，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，精密量取1，2，3，4，ml，分别置10ml量瓶中；精密称取大黄酚对照品mg，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，精密量取1，2，3，4，ml，分别加入装有同等体积的大黄素的量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为大黄素、大黄酚混合对照液。精密吸取上述溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，测定其峰面积值，以溶液浓度为横坐标，峰面积值为纵坐标，进行线性回归。得大黄素回归方程为：Y=2478X-1462，r=。结果表明：大黄素在~ μg，其峰面积与浓度之间线性关系良好。大黄酚的回归方程为：Y=3932X-2996，r=。结果表明：大黄酚在~540.μg，其峰面积与浓度之间线性关系良好。.精密度实验精密吸取大黄素及大黄酚对照品溶液各10μl，分别连续重复进样6次，测定大黄素、大黄酚的峰面积，其峰面积值RSD大黄素为%，大黄酚为%。.稳定性实验精密吸取同一批号的供试品溶液，在上述色谱条件下，于0，2，4，6，12，2h测定峰面积，大黄素、大黄酚峰面积的RSD分别为%，%，表明供试品溶液在2h内基本稳定。a大黄素b大黄酚图4大黄素及大黄酚对照品、妇舒片、阴性对照液HPLC色谱图.重复性实验取同一批号的样品6份约，按项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定。结果，大黄素、大黄酚的平均含量分别为/片和/片，RSD分别为%和%。.回收率实验取已知含量的供试品研细，精密称取6份，每份约，置2ml容量瓶中，精密加入大黄素、大黄酚混合对照品溶液ml，按项下方法操作，分别注入液相色谱仪，在上述色谱条件下测定大黄素、大黄酚的峰面积，结果大黄素的平均回收率为%，RSD为%(n=6)；大黄酚的平均回收率为%RSD为%。结果见表1~2。表1大黄素回收率 表2大黄酚回收率.供试品含量测定取本品5批，按项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下测定。结果见表3。　　3讨论.1对含量测定中样品的前处理方法进行了研究，比较了不同的提取溶剂，不同的提取方法，不同的提取时间，结果选定以甲醇溶剂作为提取溶剂，超声提取70min，既保证被测成分提取完全，又省时简便。表3妇舒片中大黄素与大黄酚的含量测定结果.2流动相组成及配比选择参考文献［1~5］，曾试用不同配比的甲醇水，甲醇%磷酸溶液，摸索液相色谱的最佳测定条件，试用结果表明，选用甲醇%磷酸溶液为流动相，大黄素峰和大黄酚峰的出峰时间较适宜，与其它共存成分分离度大于，达到基线分离。.3检测波长的选择取大黄素对照品和大黄酚对照品溶液，在200~700nm波长范围内进行扫描，结果大黄素、大黄酚在251~25nm范围内均具有较强的吸收，又据文献［1，6~7］，多采用25nm为同时测定大黄素、大黄酚的检测波长，故选择25nm为本实验的检测波长，实验表明该波长检测灵敏度高，杂质吸收峰少，干扰小，效果理想。.4 大黄中所含大黄素和大黄酚等羟基蒽醌多为与葡萄糖等结合型衍生物，约有10%~25%为游离状态［8］，为了有效、完全地提取大黄素、大黄酚，必须加入一定量的盐酸水解并进行超声提取，以促使结合型蒽醌糖苷全部水解成游离型蒽醌，以便测定大黄素和大黄酚的总量。.5本实验建立了HPLC法测定妇舒片中大黄素、大黄酚含量的方法。实验结果表明本法操作简便、准确、重现性好，可作为该制剂的质量控制方法。　　参考文献：［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，XX：18.［2］周燕雪.HPLC法测定金砂五淋丸中大黄素、大黄酚的含量［J］.青海医学院学报，XX，25：110.［3］霍艳玲，刘丽文，张曦弘.HPLC法同时测定利胆排石颗粒中大黄素及大黄酚的含量［J］.辽宁中医杂志，XX，31：251.［4］张玉臣，刘学东，王永平，等.HPLC法测定大黄通便颗粒中大黄素和大黄酚的含量［J］.中国药事，XX，19：158.［5］李彤晖，郭王保，冯一凡.HPLC法测定虎寒感冒片中大黄素的含量［J］.西北药学杂志，XX，19：208.［6］杨双杰，郭天义，李艳，等.HPLC法测定四清丸中大黄素、大黄酚的含量［J］.中国药业，XX，11：37.［7］ 鲍思泉，管水英，蒋咏梅.HPLC法测定黄连上清片中大黄素、大黄酚的含量［J］.安徽医药，XX，6：60.［8］姜韧，梁爱君，魏萍，等.高效液相色谱法测定解毒固本颗粒中大黄素和大黄酚含量［J］.解放军药学学报，XX，19：443.