人类染色体细胞遗传学技术

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1、人类染色体细胞遗传学技术云南省第一人民医院遗传诊断中心唐新华人类染色体细胞遗传学技术染色体制片原理和过程染色体命名的国际标准ISCN(2005)染色体图像分析的经验图像分析仪的运用一、染色体制片原理和过程（一）细胞及细胞周期（二）从DNA到染色体（三）染色体制作原理（四）染色体制作过程（五）不同来源标本的染色体制作（六）染色体的显带技术（一）细胞周期及有丝分裂细胞：生物体结构和功能的基本单位，也是生命活动的基本单位。图略。细胞周期：指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程。①G1期，指从有丝分裂完成到期DNA复制之前的间隙时间；②S期，指DNA复制的时期；③G

2、2期，指DNA复制完成到有丝分裂开始之前的一段时间；④M期，细胞分裂开始到结束。G0期：间期细胞，细胞周期之外的细胞。（一）有丝分裂（二）从DNA到染色体DNA螺线管超螺线管染色单体核小体压缩7倍压缩40倍压缩6倍压缩5倍共计压缩8400倍核小体nucleosome：染色质的基本结构DNA分子的不同存在形式：染色质和染色体染色质：间期细胞核中遗传物质的存在形式。染色体：分裂中期遗传物质的存在形式。一条染色体是一个DNA分子。染色质：根据在分裂期和间期的染色不同，分为常染色质：在间期核中分布较稀疏，浅染色，是转录活跃的DNA部分，一般位于核中央。在分裂期，位于染色体臂

3、，深染色。含大量功能基因。异染色质：是呈凝集状态的DNA与组蛋白的复合物，由于螺旋化程度高，又称为浓缩染色质，一般位于核内膜的边缘形成一薄圈，即称周围染色质。主要位于位于染色体的着丝粒、次缢痕、端粒等位置。间期和分裂期都深染色。基本无功能基因。染色体在细胞周期的有丝分裂中期，染色体的形态结构比较稳定，一般所描述的染色体的形态结构都是中期染色体。染色体结构：短臂p、长臂q、着丝粒—主缢痕、端粒、次缢痕、随体。染色体的多态性：随体、9号臂间倒位、次缢痕染色体染色体组型：又称核型，是指将动物、植物、真菌等的某一个体或某一分类群（亚种、种、属等）的体细胞内的整套染色体，按它们

4、相对恒定的特征排列起来的图像。核型模式图：是指将一个染色体组的全部染色体逐个按其特征绘制下来，再按长短、形态等特征排列起来的图像。从DNA到染色体请找出右图一个错误！Cell（三）染色体制作原理只有可以分裂的活细胞，才能制备染色体。使用秋水仙素或者秋水仙碱破坏纺锤丝的形成，将细胞阻留在有丝分裂中期。从而获得大量的细胞中期分裂相供染色体分析。细胞低渗技术使细胞中的染色体在玻片上铺散得更好，易于计数和观察。甲醇/冰醋酸固定液快速杀死和固定细胞。染色体显带技术，使人类能够分辨和观察更为精细的染色体结构。（四）染色体检查过程（G显带）培养细胞；秋水仙素处理；抑制中期分裂相低渗

5、；使细胞膨胀固定；染色体形态固定滴片；分散染色体。边缘着火法，冰片法，熏蒸法。显带和染色；显微镜下分析。G显带常见问题及处理：培养细胞:细菌污染。霉菌污染。细胞收获量小。玻片上细胞间期核稀疏。秋水仙素：大量染色体太细长，缠成毛线团样。分裂相很多，但染色体短小，分叉。几乎没有分裂相。低渗：太分散。不分散。固定：太发毛。背景不干净。有大团块深染色物质。（四）染色体制作过程G显带常见问题及处理：滴片；不分散。太分散。显带和染色；没有条带。条带模糊。一个分裂相内，有的染色体有条带，有的没有。有的胰蛋白酶消化太过，有的分裂相则不足。Giemsa染不上色。染色太深。染色太浅。（四

6、）染色体制作过程（五）各种组织标本的染色体制作不同的标本，不同的检查目的，需要调整染色体的制作过程。处理原则：使尽可能多的细胞进入细胞周期，旺盛生长，大量分裂，防止污染。（五）各种组织标本的染色体制作外周血：5%小牛血清RPMI-1640，+PHA。检查体细胞核型。骨髓：10%小牛血清RPMI-1640，防PHA污染。检查肿瘤细胞核型。羊水：标本珍贵。GIBICO全培养基，防止母体细胞污染。检查胎儿细胞核型。绒毛组织：…同上。细胞为细胞团（组织），防止细菌污染。清洗、剪碎后消化成单细胞或者细胞团培养。检查胎儿核型。脐带血：血液细胞，性质同外周血。一定注意防止母体污染！

7、检查胎儿核型。活检组织：如实体瘤标本。，细胞系：永生细胞。直接常规制作染色体标本即可。（六）染色体显带技术处理方法及应用G显带胰酶处理，Giemsa深带浅带Q显带氮芥奎丫因荧光亮带暗带R显带盐溶液处理，Giemsa—反带，与G带和Q带相反T显带加热后Giemsa染色—末端带，对端粒染色C显带碱处理，Giemsa—显示异染色质部分。N显带AgNO3——染核仁组织者区的酸性蛋白。随体结构。胰蛋白酶消化Giemsa染色G显带(GTG)G-bandsbytrypsinusingGiemsa（六）染色体显带技术Q显带（六）染色体显带技术氢氧化钡处理Giemsa