胃癌组织中WISP1和Ki67的表达及其临床病理意义

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1、分类号：R735.2单位代码：10159密级：公开学号：201520318硕士学位论文中文题目：胃癌组织中WISP1和Ki67的表达及其临床病理意义英文题目：ExpressionofWISP1andKi67ingastriccancerandtheclinicopathologicalsignificance论文作者：姜姗姗指导教师：辛彦教授学科专业：肿瘤学完成时间：2018年2月中国医科大学硕士学位论文胃癌组织中WISP1和Ki67的表达及其临床病理意义ExpressionofWISP1andKi67

2、ingastriccancerandtheclinicopathologicalsignificance论文作者姜姗姗指导教师辛彦教授申请学位医学硕士培养单位第一临床学院一级学科临床医学二级学科肿瘤学研究方向胃肠肿瘤侵袭与转移论文起止时间2016年10月—2018年2月论文完成时间2018年2月中国医科大学（辽宁）2018年2月III中国医科大学硕士学位论文摘要目的：Wnt1诱导信号通路蛋白1（WISP1）属于Cyr61-CTGF-Nov(CCN)家族蛋白，具有多种生物学功能，如参与细胞粘附、增殖、胚胎

3、发育、血管形成等调控，同时其在肿瘤的发生及发展中也扮演着重要的角色。目前已有的研究显示，WISP1在很多人类肿瘤中表达异常，并与肺癌、乳腺癌、肝癌等肿瘤细胞的增殖潜能、组织侵犯、远处转移以及肿瘤患者的临床病理因素密切相关，使其成为肿瘤患者诊治及预后的潜在靶点。Ki67是目前作为细胞增殖活性高低的一种标志，广泛表达于除静止期（G0期）外的细胞周期的任何时期，其阳性表达与细胞增殖、周期进展及有丝分裂关系密切，是临床上常用来评估肿瘤增殖活性的重要生物指标。本研究选取手术切除的胃癌组织标本，运用免疫组织化学检测

4、方法，评估WISP1和Ki67在胃癌组织及非癌胃粘膜组织中的表达情况，统计分析二者表达的相关性及其与胃癌临床病理因素的关系，并探讨其对胃癌发生、发展及预后的影响。材料与方法：1、临床标本及病理资料：收集中国医科大学附属第一医院肿瘤外科手术切除胃癌患者组织标本87例及其配对非癌（距癌灶边缘>5cm取材）胃粘膜组织80例。所有组织标本离体后尽快以10％中性福尔马林固定24-48小时，取材组织厚约2-3mm，脱水、透明、浸蜡，常规石蜡组织包埋，切片行HE染色，标记胃癌组织及正常胃黏膜组织，构建胃癌组织芯片，行

5、4μm连续切片备用。收集患者的临床病理信息，包括性别、年龄、Borrmann分型、WHO组织学分型、Lauren分型、肿瘤大小等，TNM分期根据国际抗癌联盟UICC(UnionforInternationalCancerControl)及美国联合癌症委员会AJCC(AmericanJointCommitteeonCancer)胃癌TNM分期准则（第8版）划分，T代表原发肿瘤胃壁浸润深度情况，N代表胃癌患者区域淋巴结转移情况，M代表胃癌远处转移情况。2、免疫组织化学染色：采用pH9.0EDTA修复液修复W

6、ISP1抗原，PV9000两步法检测胃癌组织及非癌胃粘膜组织中WISP1蛋白表达。采用pH6.0柠檬酸修复液高温高压修复Ki67抗原，免疫组织化学法检测胃癌组织中Ki67的表达。PBS替代一抗做阴性对照。3、免疫组织化学染色结果的判定：WISP1蛋白的免疫阳性反应为细胞质中III中国医科大学硕士学位论文呈现清晰的棕黄色颗粒，Ki67蛋白免疫阳性反应为细胞核中呈现清晰的棕黄色颗粒。免疫组织化学染色结果由两位经验丰富的病理医师判定，每一个病例选取2个视野，于高倍镜下计数200个细胞，根据同类细胞数中阳性细胞

7、数所占的比例，进行等级评估。结果采用半定量计分方法，根据细胞染色强度(A)和阳性细胞所占的比例(B)两者乘积来判定。即：(A)-染色强度按下列标准评定记分：0分为无色；1分为浅黄色；2分为棕黄色；3分为棕褐色；(B)-染色的阳性细胞所占比例按下列标准评定记分：0分为无阳性细胞或弱阳性细胞数<5％，1分为阳性细胞数占5%～25%，2分为阳性细胞数占26%～50%，3分为阳性细胞数占51%～75%，4分为阳性细胞数>75%。两种评分相乘(AxB)，将结果分为：0分为阴性（-），1-4分为弱阳性（+），5-8

8、分为中度阳性（++），9-12分为强阳性（+++），最终将评分为“+～+++”的病例归为WISP1阳性组，评分“0”的病例归为阴性组。Ki67免疫组织化学染色结果按照阳性细胞在计数的同类细胞的百分比记录,分为Ki67阳性细胞数≤30%和Ki67阳性细胞数>30%两组。4、利用公共数据库GEO分析WISP1在胃癌组织中表达情况及其对患者预后的影响。5、统计学处理：运用SPSS22.0(SPSSInc,Chicago,IL,USA)统计学软件进