骨形成蛋白-在骨性ii类错牙合畸形中表达

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1、骨形成蛋白-4在骨性II类错牙合畸形中表达【摘要】目的通过检测BMP-4在下颌骨发育异常导致的骨性II类错牙合畸形患者和颌骨健康发育的正常牙合志愿者不同发育阶段血液中的表达情况，以探究BMP-4的表达量与下颌骨生长量的关系。方法将年龄为10-14周岁的患者设为发育高峰组A组，年龄＞17周岁患者设为成年组B组。各组又分为骨性Ⅰ类对照组和骨性Ⅱ类错牙合组，共计4组68人。采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）和蛋白质印迹（Western-blot）法，分别检测各实验组患者血液中的BMP-4mRNA的表达量。结果①发

2、育高峰组A组：RT-PCR检测结果显示，骨性Ⅰ类错牙合畸形组中BMP-4mRNA的表达量是：1.14±0.36μg∕μl，骨性Ⅱ类错牙合畸形组中BMP-4mRNA的表达量是0.43±0.27μg∕μl，与对照组骨性Ⅰ类组比较P＜0.05。②成年组B组：RT-PCR检测结果显示，骨性Ⅰ类错牙合畸形组中BMP-4mRNA的表达量是：1.08±0.33μg∕μl，骨性Ⅱ类错牙合畸形组中BMP-4mRNA的表达量是0.79±0.225μg∕μl，BMP-4mRNA在骨性Ⅱ类与骨性Ⅰ类两组中的表达量比较无明差异不典型（P

3、＞0.05）。③Western-blot检测结果与RT-PCR检测结果一致。结论10①在下颌骨发育的高峰期，下颌发育不足与BMP-4表达的降低有一定关系。②在下颌骨成熟期，BMP-4表达量的降低可能对下颌骨的生长影响不大。【关键词】骨性Ⅱ类错牙合畸形；BMP-4；下颌骨；基因调控下颌骨的发生受到神经脊细胞周围微环境信号基因调控［5］。其中髁状突的发生与下颌骨的生长密切相关，髁状突软骨的改建在一定程度上影响着下颌骨的改建，它的生长不仅受到全身因素的调节，而且局部生长因子的反馈作用在其中也占据重要地位［6］，其调节

4、过程较为复杂。有研究证实，BMP-4可能是调控下颌骨发育的重要基因之一［7-9］。1对象与方法1.1研究对象研究对象为我院正畸科2010年-2011年因骨性错牙合畸形前来矫治的患者，无口腔不良习惯及替牙期障碍，无颌面部损伤史、无营养不良，无全身重大疾病以及其他遗传病史。选定72例，其中发育高峰组A组（10-14周岁）36例，成年组B组（年龄＞17周岁）36例。A、B组又分为骨性Ⅱ、Ⅲ类实验组各17例。选取颌骨发育及咬合关系正常的志愿者36例作为对照组，其中发育高峰期志愿者17例，成年志愿者17例。1.2研究对象

5、样本分组10实验总计4组，即发育高峰组骨性Ⅰ、Ⅱ类分别记作A1A2、成年组骨性Ⅰ、Ⅱ类分别记作B1B2，采取各组静脉血液样本，具体分组，见表1。表1实验样本分组情况骨性Ⅰ类（对照）骨性Ⅱ类（实验）发育高峰组A（10-14周岁）A1(17例)A2(17例)成年组B（大于17周岁）B1(17例)B2(17例)1.3总RNA提取离心柱型全血总RNA提取试剂盒提取总RNA，在NanoDrop2000C分光光度计（ThermoScientific，上海）下检测所提取的总RNA纯度。1.4血液总RNA纯度的检测1.4.1琼

6、脂糖凝胶电泳检测总RNA纯度根据测得的RNA浓度计算1μgRNA用于琼脂糖凝胶电泳的量，取5-8μl的RNA样品用于1%琼脂糖凝胶电以检测RNA提取的情况。经过琼脂糖凝胶电泳成像分析，如果含有2-3条清晰目的条带，无拖尾、弥散等现象，说明RNA提取质量尚可。1.4.2分光光度计检测总RNA纯度在NanoDrop2000C分光光度计（ThermoScientific，上海）下，检测总RNA吸光度值A260与A280的比值，A260/A280值处于1.6-1.9之间，说明所提取的总RNA纯度良好，可用于后续实验。1

7、.5血液总RNA逆转录合成cDNA1.5.1引物合成10根据Genebank提供的信息，引物由上海生工生物工程有限公司代理合成完成，设计人BMP-4基因（Genebank：序列号GI：34179723）及人β-actin基因（Genebank：序列号NM＿001101.3）引物，具体情况，见表2。表2引物基本情况基因产物大小（bp）引物序列退火温度（℃）PCR循环BMP-42825-TCCATGCTGTACCTGGATGA-35-TGAGTGGATGGGAACGTGT-35330β-actin3535-GCTS

8、GTCGTCGACAACGGCTC-35-CAAACATGATCTGGGTCATCTTYTC-354201.6实验数据分析RT-PCR同时测定目的基因人BMP-4和内参照β-actin，计算出各个样本原始的模板数。根据比较阈值法，来计算各个基因的mRNA表达的相对比例。采用SPSS16.0对数据进行统计学分析，P＜0.05为差异有统计学意义。2结果2.1RNA质量检测2.1.1Nano