高效液相色谱法习题

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1、高效液相色谱法习题思考题和习题1．简述高效液相色谱法和气相色谱法的主要异同点。相同点：均为高效、高速、高选择性的色谱方法，兼具分离和分析功能，均可以在线检测不同点：2．什么叫正相色谱？什么叫反相色谱？各适用于分离哪些化合物？正相色谱法：流动相极性小于固定相极性的色谱法。用于分离溶于有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质，用于含有不同官能团物质的分离。反相色谱法：流动相极性大于固定相极性的色谱法。用于分离非极性至中等极性的分子型化合物。3．在正、反相HPLC中流动相的强度是否相同？在正相色谱中，由于固定相是极性的，

2、所以溶剂极性越强，洗脱能力也越强，即极性强的溶剂是强溶剂。在反相色谱中，由于固定相是非极性的，所以溶剂的强度随溶剂的极性降低而增加，即极性弱的溶剂是强溶剂。4．什么叫梯度洗脱？它与GC的程序升温有何异同？在一个分析周期内，按一定程序不断改变流动相的组成或浓度配比，称为梯度洗提。是改进液相色谱分离的重要手段。梯度洗提与气相色谱中的程序升温类似，但是前者连续改变的是流动相的极性、pH或离子强度，而后者改变的温度。程序升温也是改进气相色谱分离的重要手段。5．常用的HPLC定量分析方法是什么？哪些方法需要用校正因子校正

3、峰面积？哪些方法可以不用校正因子？常用的HPLC定量分析方法有：外标法：外标工作曲线法、外标一点法、外标二点法等内标法：内标工作曲线法、内标一点法、内标二点法、内标对比法等使用内标和外标标准曲线法时，可以不必测定校正因子，其它方法须要用校正因子校正峰面积6．指出苯、萘、蒽在反相色谱中的洗脱顺序并说明原因。三者极性顺序从大到小是苯、萘、蒽，因此在反相色谱中的洗脱顺序为苯、萘、蒽，苯最先出峰。7．欲测定二甲苯的混合试样中对-二甲苯的含量。称取该试样110.0mg，加入对-二甲苯的对照品30.0mg，用反相色谱法测定

4、。加入对照品前后的色谱峰面积(mm2)值为，对-二甲苯：A对40.0，A对104.2；'1'间-二甲苯：A间141.8，A间156.2。试计算对-二甲苯的百分含量。（20.0%）m对=?m对A对/A间'/A间'-A对/A间A对=30.0?40.0/141.8104.2/156.3-40.0/141.8=22.1(mg)?对%=22.1110.0?100%=20.1%8．测定黄芩颗粒中的黄芩素的含量，实验方法同例1。测得对照品溶液（5.98μg/ml）和供试品溶液的峰面积分别为：7

5、06436和458932，求黄芩颗粒中黄芩素的含量。（1.55%）-6?黄芩素%=A试A对?C对?10?10?500.1255=458932706436?5.98?10-6?10?500.1255?100%=1.55%8.1、色谱定量方法的选择色谱中常用的定量方法有归一化法、标准曲线法、内标法和标准加入法。按测量参数分，又可将上述四种定量方法分为峰面积法和峰高法。这些定量方法又各有优缺点和使用范围，在什么情况下选用哪种定量方法，这是一个十分重要的而又必须正确决定的问题。如果定量方法选择的不合适，所得出的定量结果

6、也必然有较大的误差。在色谱定量分析中，选用峰高法还是选用峰面积法，主要决定在检测器的线性范围内峰高和峰面积测量的准确性和重复性。除了归一化法最好用峰面积法外，其他三种定量方法中峰高和峰面积都可用作精确的定量方法。在分离度较好，峰面积可以准确测量时，用用峰面积法定量为好。特别是在使用程序升温时。但当分离度不好色谱峰形不好(如严重拖尾)时，峰面积测量引起的误差较大时使用峰高法定量较好。保留时间短的色谱峰峰形较尖(峰尾宽较小)时峰高测定较峰面积测定准确，宜用峰高法定量；而保留时间长的色谱峰峰形较宽(峰尾宽较大)，此时

7、峰面积测定较峰高测定准确，宜用峰面积法定量。8.2、归一化法把所有出峰的组分含量之和按100％计的定量方法，称为归一化法。当样品中所有组分均能流出色谱柱，—并在检测器上都能产生信号的样品，可用归一化法定量，其中组分i的质量分数可按式(5)计算:(5)式中Ai—组分i的峰面积；—i组分的质量校正因子。当为摩尔校正因子或体积校正因子时，所的结果分别为i组分的摩尔百分含量或体积百分含量。归一化法的优点是简便、准确，特别是进样量不容易准确控制时，进样量的变化对定量结果的影响很小。其他操作条件，如流速、柱温等变化对定量结

8、果的影响也很小。归一化法定量的主要问题是校正因子的测定较为麻烦，虽然一些校正因子可以从文献中查到或经过一些计算方法算出，但要得到准确的校正因子，还是需要用每一组分的基准物质直接测定。在气相色谱的一些主要检测器、(如、FID和TCD)对某些组分，如同系物的校正因子相近或有一定的规律，从文献中可以查到或进行计算。当校正因于相近时，可直接用峰面积归一化进行定量分，例如表4.2.1给出了C8芳