使用carbopac pa200柱测定植物提取液中的的中性寡糖和多聚糖

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1、使用CarboPacPA200柱测定植物提取液中的的中性寡糖和多聚糖摘要：采用新型的阴离子交换柱对高聚合度多聚糖进行离子色谱法鉴定。应用CarboPacPA200分析柱(3×250mm)与TSKgelsuperIC-AZ(4.6mm×1cm)保护柱，柱温30℃，100mMNaOH和100mMNaOH/1M醋酸钠作为淋洗液，流速为0.5ml/min，国脉冲安培检测器。该阴离子交换柱分析速度快，分离效果好，柱效高，可用于测定植物提取液中中性寡糖和多聚糖的测定。关键词：阴离子交换柱，中性寡糖，多聚糖，离子色谱脉冲安培检测-高效阴离子交

2、换色谱（HPAE-PAD）用于测定植物提取液中的寡糖和多聚糖是已经成熟的技术（寡糖一般是由2到8个单糖利用糖苷键联合到一起的糖。）。此技术的优势在于HPAE的高分离性能，与其他技术相比，其能够测定更高的聚合度（DPs）。高聚合度的多聚糖也可以用HPAE-PAD测定，因为高效阴离子交换柱（CarboPac）具有分离高浓度小分子糖中低浓度高聚合度多聚糖的能力，而PAD具有测定低浓度高聚合度多聚糖的灵敏度。高聚合度多聚糖在HPAE-PAD的常用淋洗液—氢氧化钠和醋酸钠中也具有比其他液相技术中使用的淋洗液中更好的溶解性。近期HPAE-P

3、AD在测定食品和农产品中寡糖和多聚糖方面已经有了很多应用。在戴安公司发表的应用笔记AN67“植物提取液中的中性寡糖和多聚糖测定”中介绍了如何应用HPAE-PAD方法去分离此类化合物，表明CarboPacPA100具有比CarboPacPA1更高的分离能力。其后戴安推出的CarboPacPA200柱，比CarboPacPA1和CarboPacPA100柱具有更高分离度。分离度的改善主要是由于PA200具有更细小的基体（5.5μm）和胶体颗粒（43nm）。这些以及其余的一些改变也使得该柱分离特定寡糖时所需醋酸钠浓度比PA100的要低

4、。PA200具有3×250mm的型号，最优流速为0.5mL/min。因此除了所需醋酸钠浓度低之外，同等分离效果下PA200所需的淋洗液体积要低，降低了配制淋洗液的需求和成本，减少了废液的生成。1实验部分1.1仪器DionexBioLC色谱系统(含GP50梯度泵、ED50电化学检测器、E01淋洗液组织器，自动进样器)，Chromeleon色谱控制软件。1.2试剂去离子水，电阻率≥17.8MΩ·cm（用于所有淋洗液和标准溶液的配制）；氢氧化钠，50%（w/w）（FisherScientific）；无水醋酸钠（Fluka，Micros

5、elect）；菊粉，菊苣根（市售）；MaltrinM040（GrainProcessingCorporation）1.3色谱条件CarboPacPA200分析柱(3×250mm)分析柱与CarboPacPA200保护柱(3×50mm)保护柱，柱温:30℃，淋洗液：（A）100mMNaOH；（B）100mMNaOH/1M醋酸钠，流速为0.5ml/min，脉冲安培检测器，进样量为5μL。1.4样品处理称取25mgM040，加水配制得5.0mg/mL溶液。称取25mg菊粉，并加入100mMNaOH，按照配淋洗液的方式配制得到5.0mg

6、/mL溶液。2结果与讨论图1中比较了一种多果聚糖菊苣菊粉分别在CarboPacPA100和CarboPacPA200上的分离情况。由于PA200具有比PA100更低的柱容量（35meqvs90meq），更细的粒径(3mmvs4mm)，所以低聚糖若要从PA200柱上洗脱时间更少，分离效果更好，柱效更高。图2中比较了一种麦芽糊精样品MaltrinM040分别在CarboPacPA100柱和CarboPacPA200柱的分离情况。当分离菊苣菊粉样品时聚合度大的多糖具有相比于PA100更高的峰效率和更短的淋洗时间（例如这些多聚糖就可以用

7、更低的醋酸钠浓度淋洗出来）。更高的峰效使得可以同时检测到4个更高聚合度的多聚糖。www.sepu.net图3中比较了啤酒样品分别在PA100柱和PA200柱上的分离效果，其中PA200所需分离时间更短。同时我们再次观察到更高效的峰和基线附近的一些小峰的分离，而这在PA100柱上观察不到，而这一小部分峰由于能够得到分离从而能够被识别出来。图1菊苣菊粉在PA100和PA200上分离情况的比较图2麦芽糊精在PA100和PA200上分离情况的比较图3啤酒中麦芽糊精在PA100和PA200上分离情况的比较3结论相比于目前HPAE-PAD使

8、用的其它糖柱，使用CarboPacPA200分离寡糖和多糖具有更好的分离度，而且所需样品和淋洗液更少，分析时间更短，并且所需醋酸钠浓度更低。这为HPAE-PAD测定高聚合度的多聚糖奠定基础。参考文献[1]DionexCDlibraryorDionexwebsit