专家谈子宫肌瘤的症状12843

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1、瘦素ELISA检测试剂盒说明书（测定范围：0－50ng/ml）概述瘦素是由肥胖（OB）基因编码，主要在脂肪细胞中表达的蛋白激素，含146个氨基酸，分子量16KD。循环中的瘦素水平可反映体脂的多少，作为一种外周信号向中枢反馈体内贮脂的程度，并通过其在下丘脑受体控制食欲、增加能耗，以减低体重。基因突变导致瘦素无功能或其受体功能受损的小鼠表现为过度摄食、代谢降低、氧耗减少、过度肥胖、糖尿病和不育，用瘦素治疗小鼠可逆转上述异常。外源性瘦素作用于正常小鼠，能使其摄食减少，氧耗增加，体重减轻，性成熟早发。饮食引起的肥胖小鼠及人的瘦素治疗试验显示，可以纠正其高血糖、高胰岛素/胰岛素

2、抵抗等代谢异常状态。除肥胖外，瘦素的循环水平还受多种因素调控，禁食、雄激素、冷刺激和胰岛素增敏剂等可以降低瘦素水平，而过度进食、胰岛素、糖皮质激素及一些细胞因子可以促进脂肪细胞瘦素的分泌。尽管大量的资料研究了瘦素在肥胖中的作用，近来，越来越多的注意力集中于瘦素在代谢适应、生长发育中的独特作用。血中瘦素含量的检测已成为研究肥胖及其相关疾病发病机制和防治的重要手段和指标。本试剂盒采用生物素—亲和素放大系统，选取针对瘦素不同抗原决定簇的抗体分别用于固化于微孔中和生物素标记，夹心法定量地检测人血清（浆）中瘦素的含量，特异性强，灵敏度高。适于临床血样本测定及基础研究之用。试剂盒

3、组成1.96孔预包被微孔板1个2.20×酶免试验缓冲液1瓶（50ml）3.人瘦素标准品1管（50ng）4.生物素标记瘦素抗体1管（100μl）5.亲和素-辣根过氧化物酶溶液1管(10μl)6.底物溶液（TMB）1瓶（12ml）7.终止液（2NHCL）1瓶（15ml）8.封板模1张3自备材料：1.酶标仪（带450nm）2.加样器，带10μl、100μl、1000μl的一次性尖头3.吸水纸/巾4.去离子水试验试剂的准备1.1×试验缓冲液：950ml去离子水中加入浓缩的酶免试验缓冲液即可。本缓冲液用于试验板的洗、溶解或稀释本试剂盒中的其他组分。浓缩缓冲液使用之前置于37℃水

4、浴中使其结晶完全融化。配制好的1×试验缓冲液置于4-8℃保存。2.生物素标记的人瘦素抗体：用100μl试验缓冲液重溶冻干粉（先离心装有冻干粉的管，避免丢失粘在管壁或盖上的抗体冻干粉）。使用前将本抗体用试验缓冲液按1︰100稀释成工作液。3.亲和素-辣根过氧化物酶（SA-HRP）：使用之前用试验缓冲液1︰4000稀释成工作液。人瘦素标准品的准备标准管号标准品体积试验缓冲液标准品浓度原液冻干粉1000μl50ng/ml#1300μlof原液700μl15ng/ml#2100μlof原液900μl5ng/ml#3100μlof#1900μl1.5ng/ml#4100μlof

5、#2900μl0.5ng/ml#5500μlof#4500μl0.25ng/ml检测程序1.将试剂从4℃冰箱取出，室温平衡。2.设计实验，并在微孔条上做好标记。3.在相应孔中加入50μl标准品从#5到原液（与稀释顺序相反）、血清/血浆标本，标准需做双复孔。4.在已加有标准品、或标本的各孔中加入50μl稀释后的生物素化瘦素单抗工作液3，混匀，室温轻摇（450~500rpm）2小时。1.甩去孔中反应液，在干净吸水材料上拍干后加满试验缓冲液，放置10-15秒后拍干，如此重复5次，也可用洗板机洗6次。2.每孔加入100μl已稀释好的亲和素-辣根过氧化物酶结合物工作液，置室温轻

6、摇（450~500rpm）30分钟，重复第5步骤。3.每孔加100μl底物（TMB）溶液，室温闭光反应10-15分钟。4.每孔加入100ul终止液终止反应。5.用酶标仪在波长450nm读取OD值。结果计算手工作图采用半对数坐标纸，以标准品浓度为横坐标、相应的OD值为纵坐标作标准曲线，标本的OD值在标准曲线上的对应浓度即为该标本的瘦素含量，计算机操作采用4参数或log-log方式拟合曲线。注意事项1.请在2℃-8℃下保存并在有效期内使用，不同批号试剂，请勿混用。2.使用前，请将所有组分置室温平衡约10分钟；用时请将瓶内物混匀。试剂盒启用后尽量一次用完。未用完的试剂拧紧瓶

7、盖，板条置封袋内，2℃-8℃保存。3.建议采用新鲜血清或血浆标本，双复孔测定；标本若不能及时测定，请于-20℃存放，避免反复冻融。4.建议用校准的加样器加所有成份。5.以洗板机洗板时,每孔注液量不应少于300μl,洗板次数不应少于5次,浸泡时间不少于5秒,并注意检查加样头是否堵塞。手工洗板时,用带纸屑的吸水材料应慎重,防止外源性过氧化物酶类似物或氧化还原物与显色剂发生反应。6.用终止液终止反应后，请于30分钟内读取OD值。3