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时间:2018-08-01
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1、全国免费客户服务电话:400-715-6688地址:西安经济技术开发区凤城一路8号御道华城A座10层生物选修三复习导纲提纲(五)专题二细胞工程2.2动物细胞工程2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体【课前导学】基础知识一、动物细胞融合(又叫:细胞杂交)1.概念:指 或 动物细胞结合形成一个细胞的过程,也称细胞杂交。2.结果:融合形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞,称为 细胞。3.动物细胞融合原理:细胞膜的 。4.诱导动物细胞融合的方法:物理方法、化学方法、生物方
2、法。5.过程:6.意义:细胞融合突破了有性杂交方法的局限,使 成为可能。这一技术成为研究 、 、肿瘤和生物 培育的重要手段。二、单克隆抗体1.概念:由单一B淋巴细胞进行无性生殖形成的细胞所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。2.抗体:淋巴细胞(浆细胞)产生的,化学本质为 ,具有特异性。从血清中分离出的抗体 、纯度低、特异性差。3.哺乳动物感染病原体(如病毒、细菌等)后,体内会形成相应的B淋巴细胞。B淋巴细胞能分泌 ,凝集或杀
3、死这些病原体。但是每一个B淋巴细胞只分泌 。因此,要想获得大量的 ,必须克隆 ,形成 。4.单克隆抗体的制备(1)过程:第一步:将 注射到小鼠体内进行免疫;第二步:从该小鼠脾脏中获得能够产生抗体的 细胞,与小鼠的 细胞在 ,或聚乙二醇的诱导下融合;第三步:在特定的 培养基中,筛选出 细胞;第四步:培养杂交瘤细胞,从中挑选出 的细胞群,继续培养;第五步:将该杂交瘤细胞在体外
4、条件下大规模培养或注射到小鼠 内增殖,然后再分离纯化单克隆抗体;(2)杂交瘤细胞的特点:既能大量 ,又能产生 。5.提取单克隆抗体:从培养液或小鼠腹水中提取。特别提醒:在选择培养基上,未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡,只有 才能生长。B淋巴细胞的特点: ,缺点: 骨髓瘤细胞的特点: 。杂交瘤细胞具备具备双亲的遗传物质,不仅能产生 ,还能 ,能大量产生单克隆抗体。6.单克隆抗体的应用第7页共
5、7页全国免费客户服务电话:400-715-6688地址:西安经济技术开发区凤城一路8号御道华城A座10层(1)单克隆抗体的优点: 强、 高,并可能 。(2)诊断疾病:诊断病毒引起的疾病和用癌细胞制备的单克隆抗体定位诊断.(3)用于治疗疾病和运载药物:①运用药物与单克隆抗体连接在一起制成"生物导弹".②优点:疗效高,毒副作用小。【总结归纳】一、植物体细胞杂交与动物细胞融合比较植物细胞杂交(番茄马铃薯植株)动物细胞融合(单克隆抗体制备)过 程第1步原生质体的制备(酶解法)正常小鼠的处理
6、(注射灭活抗原)第2步原生质体的融合(物化法)动物细胞融合(物化生法)第3步杂种细胞的筛选和培养杂交瘤细胞的筛选和培养第4步杂种植株鉴定提纯单克隆抗体(特异性强、灵敏度高)原理/理论基础细胞膜的流动性、植物细胞的全能性细胞膜的流动性、细胞增殖融合前处理酶解法除去细胞壁:纤维素酶、果胶酶注射特定抗原法免疫处理正常小鼠促融因子物理法:电刺激、离心、振动化学法:聚乙二醇物化法:与植物相同生物法:灭活的仙台病毒意义和用途(1)克服有性远缘杂交不亲和性障碍(2)培育作物新品种①制备单克隆抗体②有助于疾病的诊断、治疗、预防二、制备单克隆抗体时,为
7、什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞?提示:哺乳动物感染抗原后,其体内会形成相应的B淋巴细胞,B淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫反应的过程中,每一种B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体,要想获得大量的特异性抗体,必须使能分泌该单一抗体的B淋巴细胞大量增殖。B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力,但不能在体外增殖;骨髓瘤细胞是一种癌细胞,它能在体外培养条件下无限增殖,但不能产生抗体。因此,把一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,产生杂交瘤细胞,它会兼有两个亲本细胞的特性──在体外培养条件下能不断增殖,同时能产生
8、出某种特异性的抗体。三、杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要步骤(1)抗原制备;(2)免疫动物;(3)免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备;(4)细胞融合;(5)杂交瘤细胞的选择培养;(6)杂交瘤细胞的筛选;(7)杂交瘤细胞的克隆化;
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