遗传学实验果蝇杂交实验设计书 已校对

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1、一、单因子试验1、实验原理分离定律（lawofsegregation）亦称孟德尔分离定律。一对基因在杂合状态下不互相影响，各自保持相对的独立性，而在形成配子时，就互相分开，并按照原样分配到不同的配子中去。在一般情况下，配子的理论分离比是1:1，子二代（F2）的基因型分离比是1:2:1，若显性完全，F2的表型分离比是3:1。杂种后代分离出来的隐性基因纯合体与原来隐性亲本在表型上是一样的，隐性基因并不因为和显性基因在一起而改变它的性质。单因子杂交是指一对等位基因间的杂交。野生型果蝇是长翅（+/+），其翅长超出腹部末端约1/3。残翅果蝇的双翅已经退化，

2、只留下少量残迹（vg/vg），无飞翔能力。Vg的基因座位于第二染色体67.0。对长翅（+）完全隐性。用野生型长翅果蝇与残翅果蝇杂交，子一代（F1）全是长翅。子一代系内交配，子二代产生性状分离，长翅：残翅为3:1,。基因型为+/vg（长翅），雌雄均可产生两种配子+和vg，并且各占1/2。用棋盘格表示杂交实验的配子如表1，可知F2的性状比为3:1。2、实验步骤（1）确定杂交亲本，挑选处女蝇。选用2#与18#为亲本进行杂交实验。选用野生型长翅和突变型残翅果蝇为杂交亲本。雌蝇一定要选处女蝇。处女蝇的挑选方法：亲本饲养2周之后，提前10—12小时把培养瓶内

3、所有活的成虫倒干净，然后在倒掉成虫的12小时内把新羽化的成虫倒出来，装进消毒过的培养瓶或者平底试管进行适度麻醉，麻醉后放在消毒过的白瓷板或者硬纸板上把雌雄蝇分别挑出，雌蝇即为处女蝇。根据实验所需处女蝇数量的多少，可连续收集，但不要超过3天。（2）配好杂交组合，进行正、反杂交。正交组合：野生型长翅（♀）×突变型残翅（♂）。用消毒过的毛笔把3—4只长翅处女蝇扫入培养瓶中，然后把培养瓶水平放置，以免麻醉状态下的果蝇沾到培养基或水珠而被闷死，随机用同样方法扫入3—4只残翅雄蝇，塞紧棉塞，贴好标签，保持水平直至果蝇苏醒后放入25℃恒温培养箱中培养。反交组合

4、：将亲本性别交换，方法与正交相同。注意各自做好记号，培养瓶贴上标签。（3）培养7天之后把亲本果蝇成虫全部倒出来处死。（4）再过7天F1成蝇出现，把F1成蝇转移到经过消毒的空瓶里进行适度麻醉，观察F1翅形的变化，并把结果记录进表2。把5~6对适度麻醉的F1转入另一培养瓶，标明信息。正反交各转一瓶。（5）过7天，F1成虫全部倒出处死，已有卵和成虫的培养基继续培养。（6）过7天，F2成虫出现，开始观察，可以连续观察7天左右，往后可能有F3成虫出现，所以观察时间不要超过8天。记录数据进表3，观察过的成虫集中处死。表3正、反交F2果蝇翅形观察结果记录表（7

5、）处理数据，并进行卡方检验，来确认是否符合理论猜测比值。3、实验预期结果（1）F1全部为长翅果蝇，而且正反交结果一样。（2）F2出现翅形的性状分离，并且数量比大约符合长翅：断翅为3:1，且正反交结果类似。通过卡方检验证明实际分离比与理论分离比一致。二、两对基因自由组合实验1、实验原理由非同源染色体上的两对等位基因所决定的两对相对性状，在杂种第二代是自由组合的。根据孟德尔第二定律，一对基因的分离与另一对（或者另几对）基因的分离是独立的。一对基因所决定的性状在杂种第二代是3:1，两对不连锁的基因所决定的形状，在杂种第二代就呈9:3:3:1，黑檀体果蝇

6、（e）的体色乌黑，e的基因座位于3号染色体70.7；与e相对应的野生型性状是体色灰黄。残翅果蝇（vg）的双翅几乎没有，只能看到少量残迹，vg的基因座位于2号染色体67.0；与vg相对应的野生型是长翅。由于e和vg位于不同源的染色体上，所以两对基因杂种在形成生殖细胞的时候，会产生4种不同类型的配子，其理论比例为1:1:1:1。如果子一代系内杂交，4种♂配子和4种♀配子可形成16种组合的合子，其中9种组合为灰黄长翅，3种为黑色长翅，3种为灰黄残翅，1种组合为黑色残翅。表12、实验步骤选用2#与e进行杂交试验（1）分别挑选e、vg的处女蝇，要注意麻醉瓶

7、、毛笔、白瓷板的消毒（烘箱60℃烘4h以上）。（2）把vg♀和e♂放在一培养瓶中，e♀和vg♂放在另一培养瓶中。操作类似单因子试验。（3）7天后将亲本倒干净处死。（4）7天后检查F1成虫的形状。若全为灰身长翅，则杂交成功，否则为假杂种。成功的组合挑选5~6对F1成蝇转移到新的培养瓶中继续培养。（5）7天后倒出F1成虫处死。（6）7天后，观察F2成虫，可连续观察一周（7）统计数据，处理数据，进行卡方检验。3、预期实验结果（1）F1全为灰体长翅，且正反交结果一致。（2）F2出现性状分离，且灰体长翅：灰体残翅：黑体长翅：黑体残翅约为9:3:3:1。且正

8、反交结果类似。通过卡平方检验证明实际分离值与理论分离值一致。三、三点测交与遗传作图1、实验原理位于不同染色体上的两对基因，它们决定的两对